液相色谱法测定尿中肌酐含量.doc

液相色谱法测定尿中肌酐含量

中外医学研究2012年1月第1O卷第3期CHINESEANDFOREIGNMEDICALRESEARCH影乏与检曩翳孝毒.??鸯曩?毒年毒事?雪零碧黪拿l??曩?垮gl曩雾誊毒善奠毒l?曩誊童

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【收稿日期】2011—11—15

液相色谱法测定尿中肌酐含量

吴燕

宜兴市疾病预防控制中心(江苏宜兴214206)

【摘要】目的用液相色谱法测定尿中肌酐的含量.方法样品经流动相稀释,微孔滤膜过滤后进样液相色谱测定;色谱柱为

AgilentZorbaxExtend—C18(4.6mmx250mm,5Ixm)柱,以甲醇一0.05mol/L乙酸钠(5+95)为流动相,流速0.9mL/min,柱温30?,

在波长254nm下测定,标准曲线定量.结果肌酐标准曲线线性范围内r为0.9997,回收率为97.7%,104.0%之间,RSD为2.7%,

4.2%之间,方法检出限为O.47m#L.结论本方法具有样品前处理简单,灵敏度高,影响因素少,结果准确,适合日常样品的检测工

作要求.

【关键词】液相色谱;尿肌酐测定

肌酐(C4H7N30)是肌肉在人体内代谢的产物,主要从尿液中排出.职业卫生对生物材料尿液的监测中,生物限值大都使用肌酐较正,因此,肌酐含量测定的准确性直接影响生物监测指标的准确性.

肌酐的检测方法多为临床检验方法,在职业卫生监测中,尿中肌酐的测定有两种方法,一种是分光光度法,一种是液相色谱法.分光光度法要用到苦味酸,属易爆物品.本实验室选用液相色谱法对尿中肌酐进行测定,操作简单,灵敏度高,影响因素少,结果准确.

1材料与方法

1.1仪器美国DIONEX高效液相色谱仪(P680高效液相泵,UVD170U紫外检测器,ASI一100自动进样器,TCC一100柱温箱);变色龙色谱工作站;超声波清洗仪;旋涡混合器等.1.2试剂肌酐纯度gt;99.O%;甲醇(进I:1液相色谱纯);乙酸钠(分析纯),配制成0.05mol/L的溶液;0.45m滤膜等.1.3色谱条件色谱柱:AgilentZorbaxExtend—C18(4.6mmx250mm,5m)柱;流动相:甲醇一0.05mol/L乙酸钠,比例(5+95),流速0.9ml/min;柱温:30oC;检测器:紫外检测器,波长254am;进样量:10LLl.

1.4分析步骤

1.4.1试样测定取0.05ml尿样,用流动相稀释至10m1,即200倍稀释,旋涡混合器上混合1min,经0.45m滤膜过滤后进样10l,以峰面积从标准曲线中定量.

1.4.2标准曲线称取250mg经110?干燥2h的肌酐,溶于甲醇并稀释至25mI,配制成每毫升含10mg肌酐的标准贮备液.取标准贮备液,经逐步稀释成每毫升含0,2.0,4.0,6.0,8.0,

l0.0g肌酐的标准系列,进样10l,以峰面积为纵坐标,以肌酐

含量为横坐标,绘制标准曲线.

2结果

2.1样品处理方法的选择取不同样品0.05ml各三份,分别一

68一

以200倍,300倍,500倍进行稀释,大部分样品200倍稀释均在标准曲线线性范围内,而且有较高的灵敏度,300倍和500倍稀释的灵敏度比200倍稀释低,故一般选用200倍稀释,当样品肌酐含量较高时,可适当增加稀释倍数.

2.2色谱条件的选择经试验采用与国标方法相同的条件:甲醇一0.05mol/L乙酸钠(5+95)为流动相,流速0.9ml/min;柱温30oC;进样10l,能得到较好的峰形,肌酐保留时间为2.65min.但在波长选择上,分别采集了254nm和最大吸收波长230nm的数据,标准谱图见下.230am比254am灵敏度高了两倍多,但由于在肌酐的峰前有一个小峰,在样品测定时容易影响被测组分的积分,故选取254nm为检测波长.

图1肌酐标准溶液色谱图(254nm)

2.3分析方法的线性及检出限按上1.4.2方法制作标准曲线,得Y:0.167X一0.018,线性相关系数为0.9997.同时作空白计算基线