【课件】2023-2024学年高二下学期生物竞赛课件 细胞工程.pptxVIP

第三章细胞工程;2;3.1细胞工程的基本技术;3.1.1细胞工程实验室的常见设施;倒置显微镜

细胞计数板;CO2培养箱（动物细胞培养）;液氮罐（用于冻存培养的动物细胞）;3.1.2细胞培养的基本方法

——无菌操作;细胞培养技术;细胞融合技术;核移植;3.2植物细胞工程;细胞的全能性(totipotence);外植体、愈伤组织;细胞分化、脱分化、再分化;植物细胞培养的培养基;3.2.2组织培养的基本方法;18;19;3.2.3快速繁殖技术;21;3.2.4植物脱毒技术;原理;采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5毫米带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。

所取的外植体很小，分离难度大，一般在解剖镜下操作。

马铃薯、洋葱、大蒜、兰花、菊花、康乃馨、水仙、唐菖蒲、香蕉、苹果、柑橘、葡萄等。;华中农大马铃薯脱毒试管苗;3.2.5次生物质与植物细胞的大量培养;第一个商品化的细胞大规模培养的植物是紫草。

1983年，日本三井石油化学工业公司利用紫草细胞大规模培养生产紫草宁，最终浓度达1400mg/L，宣布把紫草宁作为燃料和药物进行工业化生产。;28;3.2.6原生质体培养与细胞融合;细胞融合的方法;31;3.2.7人工种子;体细胞胚;包埋介质海藻酸钠;三大难题有待克服;3.3动物细胞工程;3.3.1动物细胞培养;培养器具;几个概念;原代培养(primaryculture);传代培养(subculture);42;在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的pH为7.2－7.4，此环境下胃蛋白酶（最适pH2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。;44;3.3.3体外培养的动物细胞的生长类型;贴壁依赖性细胞;接触抑制;48;贴壁非依赖性细胞;3.3.4动物细胞培养条件;3.3.5动物细胞的冻存与复苏;冷冻保存方法;53;3.3.6动物细胞培养应用;3.4单克隆抗体;56;57;58;59;60;61;①动物免疫与免疫脾细胞悬液的制备;63;64;65;66;67;68;69;3.4.3单克隆抗体的应用;3.5核移植与克隆动物;一、什么是克隆;

分子水平克隆：PCR技术

细胞水平克隆：动物细胞培养（单克隆抗体）

个体水平克隆：克隆羊多利;二、（动物细胞的）核移植;;胚胎核移植在多种动物上获得了克隆后代:

绵羊(Willadsen等,1986),

牛(Prather等,1987),

兔(Stice等,1988),

猪(Prather等,1989),

山羊(张勇等,1991)等。

1997年，由Mengetal成功地克隆出两只猴,这是灵长类动物的首次被克隆。

;1938年

汉斯·斯皮曼（克隆之父）;HansSpemann;RobertBriggs

(1911-1983);1958年到1962年，英国剑桥大学的JohnGurdon和Machineer利用爪蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾．

1970年JohnGurdon以同样的方法，用青蛙脚蹼角质化细胞进行移核试验，蛙卵发育成了蝌蚪。;童第周;上个世纪60年代，童第周对金鱼、鲫鱼进行细胞核移植。

1978年又成功地进行了黑斑蛙的克隆试验，他将黑斑蛙的红细胞的核移入事先除去了核的黑斑蛙卵中，这种换核卵最后长成能在水中自由游泳的蝌蚪。;生物遗传性状是细胞核和细胞质相互作用结果;（二）、核移植分类;胚胎细胞核移植技术;此后，胚胎细胞的核移植在多种动物上获得了克隆后代:

绵羊(斯蒂恩·威拉德森等,1986),

牛(Prather等,1987),

兔(Stice等,1988),

猪(Prather等,1989),

山羊(张勇等,1991)等。

1997年，由成功地克隆出两只猴,这是灵长类动物的首次被克隆。

;哺乳动物体细胞核移植技术;里程碑式的突破;绵羊“多莉”整个克隆过程如下：;HelloDolly!;为什么？;1切开卵母细胞透明带

2挤出卵母细胞细胞核

3注入供体细胞核

4电融合仪融合

;胚胎细胞核移植;1998年7月，美国夏威夷大学Wakayama等报道，由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，这是继“多莉”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。

此后，体细胞核移植技术在牛、山羊、猪等多种动物获得成功。。

至1999年底，全世界已有6种类型细胞——胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管／子宫上皮细胞、肌肉细胞和耳部皮肤细胞的体细胞克隆后代成功诞生。

;2000年，杨向中博士领导的实验室在美国从体外培养6-