快速定量PCR技术原理讲解.pptx

快速定量PCR技术原理讲解汇报人：XX2024-01-16

CATALOGUE目录引言PCR技术基本原理快速定量PCR技术原理快速定量PCR技术操作流程快速定量PCR技术应用领域快速定量PCR技术优缺点及挑战

引言01CATALOGUE

快速定量PCR技术是一种在分子生物学研究中广泛应用的工具，用于快速、准确地检测和定量特定的DNA或RNA序列。在临床医学领域，快速定量PCR技术对于疾病的诊断、治疗和预防具有重要意义，如病毒感染、遗传性疾病等的检测。目的和背景临床应用需求分子生物学研究工具

实时荧光定量PCR利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增过程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析。高通量测序技术结合高通量测序技术，实现对多个样本、多个基因的同时检测和定量分析。自动化和智能化采用自动化和智能化技术，提高实验的准确性和效率，降低人为误差。快速定量PCR技术概述030201

PCR技术基本原理02CATALOGUE

通过加热使DNA双链解离成单链。变性温度降低后，引物与单链DNA模板结合。退火在DNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，引物沿着模板链延伸，合成新的DNA链。延伸PCR反应过程

DNA模板引物dNTPDNA聚合酶PCR反应体系组扩增的DNA片段。与DNA模板特异性结合的寡核苷酸片段，用于指导DNA合成。脱氧核糖核苷三磷酸，是DNA合成的原料。催化DNA合成反应的酶。

温度控制通过控制变性、退火和延伸的温度和时间，实现PCR扩增的特异性。DNA聚合酶的选择性DNA聚合酶对模板的选择性保证了PCR扩增的特异性。引物特异性引物与模板的结合是特异性的，保证了PCR扩增的特异性。PCR扩增特异性

快速定量PCR技术原理03CATALOGUE

荧光染料法荧光染料结合荧光染料（如SYBRGreen）能够非特异性地结合到双链DNA的小沟中，当其与DNA结合后，荧光强度大大增强。实时监测在PCR扩增过程中，荧光染料结合到新合成的双链DNA上，荧光信号被实时监测。随着PCR产物的增加，荧光信号也相应增强。定量分析通过比较未知样品与标准品的荧光信号强度，可以对未知样品中的目标DNA进行定量分析。

特异性探针设计01针对目标DNA序列设计特异的荧光探针，探针通常包含一个荧光基团和一个淬灭基团。探针杂交与切割02在PCR扩增过程中，荧光探针与模板DNA杂交。当DNA聚合酶遇到探针时，其5→3外切酶活性将探针切割，使得荧光基团与淬灭基团分离，发出荧光。实时监测与定量分析03荧光信号的实时监测可以反映PCR产物的增加。通过比较未知样品与标准品的荧光信号强度，可以对未知样品中的目标DNA进行定量分析。荧光探针法

将PCR反应液分散到大量的微反应单元中，每个单元中理论上只包含一个或零个目标DNA分子。样品分散在每个微反应单元中进行PCR扩增，扩增结束后对每个单元进行检测，记录阳性（有目标DNA）和阴性（无目标DNA）单元的数量。终点检测根据泊松分布原理，通过计算阳性单元的比例可以推算出原始样品中目标DNA的绝对数量。这种方法具有极高的灵敏度和精确度。定量分析数字PCR法

快速定量PCR技术操作流程04CATALOGUE

适用于各种类型的生物样本，如细胞、组织、血液、体液等。样本类型核酸提取核酸定量使用合适的核酸提取方法，从样本中提取高质量的DNA或RNA。利用分光光度计或荧光定量仪对提取的核酸进行定量，确保后续实验的准确性。030201样本准备与处理

123根据实验需求，配制合适浓度的PCR反应液，包括引物、dNTPs、缓冲液等。反应液配制将核酸模板、PCR反应液及荧光染料等按一定比例加入PCR管中，注意避免污染。加样操作根据实验结果，对反应体系进行优化，如调整引物浓度、改变退火温度等，以提高PCR的特异性和灵敏度。反应体系优化反应体系配制与加样

将加样后的PCR管放入PCR仪中，设置合适的扩增程序，进行PCR扩增。PCR扩增在PCR扩增过程中，实时收集荧光信号，记录荧光强度的变化。荧光信号收集根据实验需求选择合适的荧光染料，如SYBRGreenI、TaqMan探针等。荧光染料选择PCR扩增及荧光信号收集

结果解读根据数据分析结果，判断样本中目标基因的表达情况，如基因拷贝数、表达量等。实验质量控制设立内参基因、重复实验等措施，确保实验结果的准确性和可靠性。数据分析使用专业的数据分析软件，对收集的荧光信号进行分析，得到Ct值、扩增曲线等关键数据。数据分析与结果解读

快速定量PCR技术应用领域05CATALOGUE

03预后评估定期检测患者体内相关基因的表达变化，评估治疗效果和患者预后情况，及时调整治疗方案。01疾病诊断利用快速定量PCR技术对病原体特异性基因进行扩增和检测，实现疾病的快速准确诊断，如新冠病毒、流感病毒等