实验一玉米花粉母细胞涂抹制片.pptVIP

实验安排

1、玉米花粉母细胞涂抹制片

2、根尖压片

3、大麦染色体的核型分析

4、植物DNA的提取

5水稻胚的组织培养

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玉米花粉母细胞

涂抹制片

2010.5.26

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玉米花粉母细胞涂抹制片

实验目的

学习和熟悉植物花粉母细胞染色体制片技术。

通过实验加深对植物的减数分裂和植物雄配子体形成过程的认识。

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实验材料

玉米杂合易位株正在进行减数分裂中的雄穗。

玉米花粉细胞减数分裂通常发生在雄穗尖端露出前5-10天，但是雄穗仍旧被叶鞘包卷，当包裹处开始变得松软膨大时，花粉母细胞开始减数分裂；除此之外还要考虑雄穗的大小，小花长短和颜色等因素。

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玉米是一年生的禾本科植物，雌雄花序同株而异花，交配手续简便，一个果穗可产生大量的种子后代。

变异类型丰富染色体较大，且数目较少

（2n＝20），便于观察。

玉米易于种植管理，取材方便。

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小孢子显微结构图

花粉发育过程

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减数分裂示意图

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实验药品与器具

药品：醋酸洋红，45％醋酸，

卡诺固定液（95％乙醇冰醋酸=3:1）。

器具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，

镊子，刀片等。

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实验方法与步骤

1.取材

玉米的最后一片叶露出叶尖时，形成大喇叭口的一周前，当喇叭口下部开始出现松软膨大的时候，用刀片破叶取出其中花序检查，材料要求尚未变黄，变黄则其中均为花粉粒，在小而绿的花药中才有处于减数分裂的细胞。

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2.固定

将收集材料去除太老和太嫩的小穗，置于卡诺固定液中24小时保存，固定液的量不少于材料体积的5倍。

如果需要长期保存，可以将材料保存至70％乙醇中存放在冰箱里。

固定作用：迅速杀死材料的活细胞，使染色体核蛋白变形，以保持染色体固有的形态。

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3.制片

用镊子从固定瓶中取出1-2条雄穗分支，选取合适部位的小花，夹出1-2个花药，置于载玻片上，滴加少量醋酸洋红，截断花药，并反复地轻轻挤压花药，使花粉母细胞溢出。

静置染色2-3分钟，去除花药壁残留杂质，置于低倍镜下观察，粗略判断分裂期，若小穗过老，则往下取材，反之则往上取。

材料合适后盖上盖玻片，使染液刚好布满载玻片与盖玻片之间成一薄层。

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用滤纸吸去盖片周围染料，然后在酒精灯下轻微加热，以利于进一步着色和染色体分散，在盖玻片上覆以吸水纸用拇指适当加压。

若细胞质染色过深，可以在盖片一侧添加45％醋酸，另一侧用滤纸吸，减轻细胞质染色。

有两点需要注意：

1、盖上盖玻片后，不要再次移动盖玻片。

2、加热时要均匀受热，勿使染料沸腾。

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4.镜检

查找花粉母细胞减数分裂各时期的分列相。

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制片流程图

选取合适小花

取出花药，滴加染液，挤出花粉

压片后，酒精灯微微烘烤

显微镜下镜检

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细

线

期

偶

线

期

粗

线

期

终

变

期

减数分裂前期Ⅰ

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减

数

分

裂

中

期

Ⅰ

减

数

分

裂

后

期

Ⅰ

减数分裂后期Ⅰ

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实验报告

画出显微镜下观察到的染色体状态，每人需画出两个不同时期花粉母细胞的染色体。

思考题：简要说明减数分裂和有丝分裂的区别和联系。

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减数分裂前期Ⅰ［细线期和终变期—较大的核仁存在］

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玉米花粉母细胞染色体的减数分裂

减数分裂

末期Ⅰ

减数分裂

前期Ⅱ

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减数分裂前期Ⅱ和中期Ⅱ

花粉母细胞呈现二分体形式，不同之处为核内染色体状态不一样，散乱/赤道板处整齐排列．

减数分裂后期Ⅱ

分别在两个细胞内的着丝粒分裂，染色单体移向两极．

减数分裂末期Ⅱ

细胞呈现为四分体形式，又称为四分孢子，每一个细胞进一步发育为成熟花粉粒．

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