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serum(OmegaScientific)inRPMI1640with10mMHEPESbuffer,2mMl-glutamine,iso-andallograft.Alightandelectronmicroscopicandimmunohistochemicalysisoffourcases.
100Uml21penicillinand100mgml21streptomycin(allfromCambrexBioScience).Lab.Invest.53,132–144(1985).
T-cellcloneswereexpandedwithIL-2,assayedonday9or10post-stimulationand28.Jaeckel,E.,Lipes,M.A.vonBoehmer,H.Recessivetolerancetopreproinsulin2reducesbutdoesnot
re-stimulatedaspreviouslydescribed11.abolishtype1diabetes.NatureImmunol.5,1028–1035(2004).
Antigenreactivitywaaminedusingirradiated(5,000rads)PriessEBV-transformed29.Nakayama,M.etal.Primeroleforaninsulinepitopeinthedevelopmentoftype1diabetesinNOD
Bcells(homozygousforDRB1*0401)orQBLBcells(homozygousforDRB1*0301)mice.Nature:10.1038/nature03523(thisissue).
pulsedwithpeptide(250mMforFig.1a)inthepresenceorabsenceofantibody30.Yoon,J.W.etal.ControlofautoimmunediabetesinNODmicebyGADexpressionorsuppressionin
(10mgml21anti-DRLB3.1andanti-DQIVD12)for2h,washedandtedintriplicateatbetacells.Science284,1183–1187(1999).
50,000cellsperwellwithequalnumbersofT-cellclones.EachT-cellclonewasalsoted31.Han,M.etal.InvariantorhighlyconservedTCRaareexpressedondouble-negative
þ22þ
ontote-boundanti-CD3antibody(OKT3;0.05mgperwell)toassesstheviabilityof
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