微生物的培养与应用.ppt

二、结果分析与评价1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。第31页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三关于微生物的培养与应用第1页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三第2页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三一、微生物的实验室培养（一）培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称培养基一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养基的营养构成”）。培养基的基本成分第3页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三培养基的种类（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。第4页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三（二）无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。第5页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三消毒无菌技术的种类灭菌使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒；将培养皿、接种用具进行灭菌；接种的过程要在酒精灯附近进行。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。第6页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)消毒的方法：第7页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三1.灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌（如教材16页图2-2所示）。（2）常用的灭菌方法2.干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。3.高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材16页图2-4）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持15～30min即可。第8页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定容至1000mL2.称量按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。第9页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加蒸馏水定溶至100mL。4.灭菌(先调PH)将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），放到高压锅内灭菌；培养皿（用几层报纸包好）放入干热灭菌箱内灭菌。5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板（如教材17图示）。第10页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第11页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第12页，讲稿共44页，2023年5月2日，星期三（二）纯化大肠杆菌