兔自身免疫性干眼模型制作及检测.ppt

CompanyLogo关于兔自身免疫性干眼模型制作及检测第1页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型概要通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞，建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。从而建立稳定的兔自身免疫性干眼模型，对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。第2页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型实验动物：成年雌性新西兰白兔，体质量2.6～3.5kg。实验前进行兔子临床眼科检查,排除已患有眼部炎症和其他疾病的动物，建立正常兔眼的临床检查指标的基线水平。饲养环境符合医学实验动物环境的要求，动物饲养房温度为25±2℃，相对湿度50%～75%，12小时光照昼夜循环，通风状况好。第3页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型实验所用的主要仪器、设备及材料：生物超净工作台CO2恒温细胞培养箱移液枪-80℃超低温冰箱倒置相差显微镜台式离心机裂隙灯显微镜摄像系统离心管、枪头PCR仪实时定量PCR仪流式细胞仪流式管超纯水装置低温水箱裂隙灯显微镜恒温水浴锅眼科手术器械祸旋仪高压蒸汽消毒器电子天平鼓风式干燥箱磁力搅拌器PH测量计荧光显微镜SY-600恒温水箱Nylon细胞滤网第4页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型主要试剂及溶液配制：淋巴细胞培养基（CM）RPMI1640细胞培养基450ml胎牛血清（FBS）10%青链霉素100U/mlL-谷氨酰胺2mM2-mercaptoethano0.5ml泪腺上皮细胞培养基（DMEM）DMEM（1Xhighglucose）450ml胎牛血清（FBS）10%青链霉素100U/mlL-谷氨酰胺2mM第5页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型主要试剂及溶液配制：Hams液HamsF-121LHepes10ml/L牛血清蛋白蛋白（BSA）100U/ml胰蛋白酶抑制剂50mg/L丁酸0.22g/L青链霉素100U/mlL-谷氨酰胺2mM亚油酸1mg/ml42ul各组分充分溶解于900mlHam’sF-12后调节PH值至7.4，Ham’sF-12定容至1000ml，0.22μm滤器过滤，4℃冰箱保存备用。第6页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三兔自身免疫性干眼模型主要试剂及溶液配制：Hanks液HanksSalts1bottleHepes2.38gEDTA0.76g各组分充分溶解于900ml超纯水后调节PH值至7.4，超纯水定容至1000mL，0.22μm滤器过滤，4℃冰箱避光保存。混合消化酶（CDH）胶原酶collagenaseⅠ450unit/ml透明质酸酶hyyaluronidase200unit/mlDNA酶Ⅰ25unit/ml分别称取计算