单基因遗传病的研究策略.ppt

基因敲除小鼠表型基本正常第57页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三转基因小鼠表型与人类疾病相似第58页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三结论Loricrin基因突变可引起新的疾病表型Loricrin突变蛋白获得新功能，通过其核定位信号介导了突变蛋白的核转位第59页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三Haploinsufficiency：

PAX6基因单倍剂量不足影响胰岛素成熟过程导致糖耐受异常

Diabetologia.2009;52:504-13第60页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三先天性无虹膜家系第61页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三遗传标记进行连锁分析时需要的一些已知遗传位点，这些位点应按孟德尔方式遗传，且具有多态性以便显示连锁关系，这些标记位点称为遗传标记RFLP，STR,SNP第25页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三连锁分析结果第26页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三连锁分析结果第27页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三基因定位：将致病基因确定到染色体的实际位置未知致病基因定位克隆研究基因克隆：确定致病基因第28页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三定位克隆基本方法和步骤收集家系，选择遗传标记进行连锁分析，对目的基因作图定位确定候选位置，对目的基因进行精细定位从候选基因中确定正确的基因（二代测序技术）第29页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三例：一个X连锁肌肉病家系致病基因的定位克隆研究第30页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三家系情况及前期研究基础先证者Ⅲ2临床表现近似DMD排除了DMD/EMD/FHL1基因突变第31页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三研究策略全基因组90万个SNP位点；8例样本；商业公司完成选取数个SNP点；增加3个成员连锁区域内的基因：MapViewer；基因表达：UniGene数据库及HGNC网站；基因功能：OMIM数据库1例样本(I2)；商业公司完成第32页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三SNP芯片数据分析连锁分析提示X染色体有三段连锁区域：第33页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三单体型分析第34页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三???GenemaplocusGRCh37.p5PrimaryAssembly(STS)Physicaldistance(Mb)GeneticDistance(cM)GeneticMap(Marshfield)(cM)???Xp22.32-p22.25,761,897-12,538,7316.785.0715.42-20.49????Xp21.2-p21.131,289,217-32,011,2660.720.5733.05-33.62????Xq24-q27.2117,088,056-140,038,59422.9515.2670.80-86.06三段连锁区域第35页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三精细定位分析将Xp22.32-p22.2连锁区域由6.78Mb缩短为4.18Mb第36页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三排除Xp21.2-p21.1连锁区域第37页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三肯定Xq24-q27.2连锁区域第38页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三最终确定两段连锁区域GenemaplocusGRCh37.p5PrimaryAssembly(STS)Physicaldistance(Mb)GeneticDistance(cM)Marshfield(cM)Xp22.32-p22.25,761,897-9,946,6564.182.1015.42-17.52Xq24-q27.2117,088,056-140,038,59422.9515.2670.80-86.06?第39页，讲稿共83页，2023年5月2日，星期三连锁区域内包含的基因Xp22.32-p22.2连锁区域共28个基因：14个已知基因,14个预测基因14个已知基因：6个基因在肌肉组织中表达（3个基因表型已知，均与肌肉病无关）7个基因不在肌肉组织表达1个基因表达情况未知第40页，讲稿共83页，2023年