分子生物学常用检测技术.ppt

关于分子生物学常用检测技术第1页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三第2页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三DNA—四种核苷酸（A-T-C-G)组成的多聚骨架所有组成DNA的核苷酸dATP,dTTP,dCTP,dGTP都由三种成分组成：1）一个2’-脱氧核糖（戊糖）2）一个含氮碱基嘌呤：A\G嘧啶：T/C3）三个磷酸基团各单个核苷酸由5’和3’-碳形成的磷酸二酯键连接在一起第3页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三变性、复性、退火和淬火第4页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三基因第5页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三分子生物学常用技术PCR（聚合酶链式反应）核酸分子杂交基因芯片技术(biochip)DNA测序（DNAsequencing）DNA重组技术(DNArecombination)第6页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三一、聚合酶链反应

（PolymeraseChainReaction，PCR）体外基因扩增技术特异性强灵敏度高操作简单、省时对待检原始材料质量要求低高效率的基因扩增技术第7页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三（一）PCR原理原理双链DNA变性退火链延伸（膜板）（双链分成单链）（膜板与引物杂交）（DNA合成）不断重复第8页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三PCR反应体系Mg2+Mn2+dCTPdGTPdTTPdATPTaqDNA聚合酶模板引物和或和（二）PCR反应的设计及影响因素第9页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三PCR的种类荧光定量PCR通用引物PCR多重PCR巢式PCRRT-PCR原位PCR免疫PCR……第10页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三TaqMan探针reverseprimerRQforwardprimer33553551.PolymerisationprobeRQ33553552.StranddisplacementQ33553553.CleavageR3553554.PolymerisationcompletedQRR=ReporterQ=Quencher3荧光定量PCR第11页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三定量PCR的数学原理PCR理论方程N=N0x(1+E)nN：扩增数量N0：起始模板数量E：扩增效率N：循环数Log[DNA]循环数线性增长期Linear平台期Plateauy=N0(1+e)n指数增长期Geometric第12页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三定量PCR的数学原理Rn(荧光强度)循环数CycleNumber指数增长期平台期CT=-klogN0+bCt?（Cyclethreshold）值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值（threshold）时所经历的循环数。第13页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三PCR的临床应用对病原微生物核酸进行快速检测弥补免疫检测的缺陷缩短诊断的窗口期（如HBV,HIV）用于药物疗效监测和评估用于肿瘤基因表达方面的研究用于遗传病的诊断第14页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三样本采集要求第15页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三第16页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三二、核酸分子杂交根据核酸变性和复性的原理，不同来源的变性单链核酸分子在合适的条件下，通过碱基互补形成双链杂交体的过程称为核酸分子杂交（molecularhybridization）。第17页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三1、遗传病的诊断2、病原体的鉴定3、癌基因突变的检测4、组织配型5、亲子鉴定核酸分子杂交的临床应用第18页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三三、基因芯片技术基质材料分，有尼龙膜、玻璃片、塑料、硅胶晶片、微型磁珠等。第19页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列原位合成法在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列第20页，讲稿共30页，2023年5月2日，星期三基因芯片技术的应用1、药物