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饲料中辣椒红的测定高效液相色谱法
1范围
本文件描述了饲料中辣椒红的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中辣椒红的测定。
本文件的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.1mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中的辣椒红（以辣椒红素和辣椒玉红素表示）用乙腈提取，高效液相色谱仪测定，外标法定量。
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
5.1水：GB/T6682，一级。
5.2乙腈：色谱纯。
5.380%乙腈溶液：取80mL乙腈，加水稀释至100mL，混匀。
5.4辣椒红素和辣椒玉红素标准储备溶液（100μg/mL）：准确称取辣椒红素（CAS号：465-42-9，纯
度不低于95%）和辣椒玉红素（CAS号：470-38-2，纯度不低于95%）标准品各10mg(精确至0.01mg)，
分别置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解、定容，混匀。2℃～8℃保存，有效期为1个月。
5.5混合标准中间溶液(10μg/mL)：准确移取1mL辣椒红素和辣椒玉红素标准储备溶液（5.4）于10mL
棕色容量瓶中，用乙腈稀释、定容，混匀。临用现配。
5.6混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.5）于10mL棕色容量瓶中，用80%乙腈
溶液（5.3）稀释、定容，混匀。配制系列标准溶液，浓度分别为0.020g/mL、0.10g/mL、0.20g/mL、
1.0g/mL、2.0g/mL和5.0g/mL。临用现配。
5.7微孔滤膜：0.2μm，有机相。
6仪器设备
6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。
6.2分析天平：精度为0.1mg和0.01mg。
6.3涡旋混合器。
6.4离心机：转速不低于10000r/min。
6.5超声波清洗器。
7样品
3
按照GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全部过0.425 mm分析筛，混合均匀，装入密
闭容器中，避光保存，备用。
8试验步骤
警示—以下操作避光进行。
8.1提取
平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.1mg），置于50mL离心管中，准确加入10mL乙腈，
涡旋振荡1min（如果粘稠加一颗陶瓷均质子），超声10min，于10000r/min离心5min。准确移取0.8
mL上清液，加入0.2mL水，涡旋混合均匀。用微孔滤膜（5.7）过滤，滤液待测。
8.2液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C18柱，长100mm，内径4.6mm，粒径2.7μm，或性能相当者；
b）柱温：35℃；
c）检测波长：475nm；
d）流速：1.0mL/min；
e）进样量：10L；
f）流动相：A相为乙腈（5.2），B相为水（5.1），梯度洗脱程序见表1。
表1梯度洗脱程序
minA%B%
时间（）相（）相（）
0.007525
1.001000
6.001000
6.107525
10.0075
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