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饲料中维生素E的测定高效液相色谱法

1范围

本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。

本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生

素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复

合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。

本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

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文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4第一法皂化提取法

注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜

中操作。

4.1原理

试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。

4.2试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2无水乙醇：色谱纯。

4.2.3无水乙醇。

4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。

1

4.2.5甲醇：色谱纯。

4.2.6乙腈：色谱纯。

4.2.7甲酸。

4.2.8L-抗坏血酸。

4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。

4.2.10无水硫酸钠。

4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混

匀。

4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。

4.2.15维生素E（dl-α-生育酚）标准储备溶液（1.0mg/mL）：称取100mgdl-α-生育酚标准品（CAS

号：10191-41-0，纯度≥99.0%，或有证标准物质）（精确至0.00001g）于100mL棕色容瓶中，用无水

乙醇（4.2.2）溶解并稀释至刻度，混匀，－18℃以下避光保存，有效期12个月。

4.2.16维生素E标准系列溶液：准确吸取适量的维生素E标准储备溶液（4.2.15），于100mL棕色容

量瓶中，用甲醇（4.2.5）稀释并定容，混匀，配制成质量浓度分别为0.5µg/mL、1µg/mL、5µg/mL、

10µg/mL、50µg/mL、100µg/mL、200µg/mL标准系列溶液。

4.2.17酚酞指示剂（10g/L）：称取1g酚酞，用95%乙醇溶解，并稀释至100mL，混匀。

4.2.18固相萃取柱：填料为聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物，200mg/6mL，或性能相当者。

4.2.19微孔滤膜：孔径0.22μm，有机系。

4.2.20氮气：纯度≥99.9%。

4.3仪器和设备

4.3.1高效液相色谱仪：配有紫外吸收检测器（或二极管矩阵检测器）；

4.3.2分析天平：精度为0.01mg和0.1mg。

4.3.3回流装置：圆底烧瓶和冷凝管。

4.3.4恒温水浴，控温精度±2℃。

4.3.5旋转蒸发仪。

4.3.6离心机：转速不低于10000r/min。

4.3.7固相萃取装置。

4.3.8氮吹仪：带加热装置，温度可控制在（50±2）℃。

4.3.9涡旋混合器。

4.4样品

配合饲料、浓缩饲料、精料补充料试样，按照GB/T20195规定制备试样，至少200g，粉碎使其全

部通过1mm孔径的试验筛，混合均匀，装入密闭容器中，2℃~8℃避光保存，尽快测定。复合预混合

饲料试样、维生素预混合饲料试样装入密闭容器中，2℃~8℃避光保存，尽快测定。

4.5试验步骤

4.5.1试样溶液的制备