【中医课件】生药学基础-.ppt

第五节理化鉴定生药的理化鉴定是利用某些物理的、化学的或仪器分析的方法，对生药及其制剂中所含有效成分或主要成分进行定性和定量分析，以鉴定其真伪和品质优劣程度。理化鉴定的实验方法，一般是用少量的生药粗粉、切片、浸出液或经初步提取分离后进行分析。一、物理常数物理常数包括相对密度、旋光性、折光率、硬度、粘稠度、沸点、熔点等。这对挥发油、油脂类、树脂类、液体类生药和加工品类等生药的真实性和纯度的鉴定，具有特别重要的意义。二、一般理化鉴别1.呈色反应利用生药的某些化学成分能与某些试剂产生特殊的颜色反应来鉴别。2.沉淀反应利用生药的某些化学成分能与某些试剂产生特殊的沉淀反应来鉴别。如赤芍用水提取，滤液加三氯化铁试液，生成蓝黑色沉淀。3.泡沫反应和溶血指数的测定利用皂苷的水溶液振摇后能产生持久性的泡沫和溶解红细胞的性质，可测定含皂苷类成分生药的泡沫指数或溶血指数作为质量指标。4.微量升华利用中药中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，在显微镜下观察其结晶形状、颜色及化学反应作为鉴别特征。5.显微化学反应将生药的干粉、切片或浸出液少量，置于载玻片上，滴加某些化学试液，是产生沉淀或结晶，在显微镜下观察反应结果；或观察所产生的特殊颜色。如黄莲粉末滴加稀盐酸，可见针簇状小檗碱盐酸盐结晶析出；或滴加30%硝酸，可见针状小檗碱硝酸盐结晶析出。6.荧光分析利用生药中所含的某些化学成分，在紫外光或自然光下能产生一定颜色的荧光性质进行鉴别。通常直接取生药饮片、粉末或浸出物在紫外光灯下进行观察。如，黄莲饮片显金黄色荧光；牛膝饮片显黄白色荧光；五加皮的水或乙醇浸出液显紫色荧光。有些生药本身不产生荧光，但用酸、碱或其它化学方法处理后，可是某些成分在紫外光灯下产生荧光。例如芦荟水溶液与硼砂共热，所含芦荟素即起反应显黄绿色荧光。三、色谱法生药鉴定中常用以下三种色谱法：1.薄层色谱法（TLC）在薄层色谱鉴别中，一般选用已知主成分的对照品或对照生药的相同提取物相对比，经薄层展开后，用一定方法显色，样品色谱应与对照物色谱在相应的位置上，有相同颜色的斑点或主斑点。稳定的薄层色谱可作为中药的鉴别特征。目前薄层色谱法已经成为中药鉴别最常用的重要方法之一。2.气相色谱法（GC）含挥发油及其它挥发性组分的中药材及其制剂最适用于气相色谱法进行分析。如《中国药典》规定用气相色谱法进行含量测定。3.高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液而不需要气化，因此不受样品挥发性的约束。对于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为有利。如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、维生素以及无机盐等都可利用高效液相色谱法进行分离和分析。四、分光光度法1.紫外分光光度法此法不仅能测定有色物质，对有共轭双键等结构的无色物质也能精确测定，具有灵敏、简便、准确的特点，即可作定性分析又可作含量测定。2.可见分光光度法是比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。常使用的仪器为可见分光光度计或比色计。3.红外分光光度法因为红外光谱的专属性强，几乎没有两种单体成分的红外光谱完全一致，所以，红外光谱对生药成分的定性鉴别可得到较准确的结论。4.原子吸收分光光度法本法的特点为专属性强，检测灵敏度高，测定快速，是目前用于测定中药和中药制剂中微量元素的最常用方法之一。第六节DNA分子标记鉴定DNA分子遗传标记技术直接分析生物的基因型，与传统的方法比较，具有下列特点：1、遗传稳定性：DNA分子作为遗传信息的直接载体，不受外界因素和生物体发育阶段及器官组织差异的影响，每一个体的任一体细胞均含有相同的遗传信息。用DNA分子特征作为遗传标记进行物种鉴别更为准确可靠；2、遗传多样性：DNA分子是由G、A、C、T四种碱基构成，为双螺旋结构的长链分子，生物体特定的遗传信息便包含在特定的碱基排列顺序中，不同物种遗传上的差异表现在这4种碱基排列顺序的变化，这就是生物的遗传多样性；3、化学稳定性：DNA分子作为遗传信息的载体，除具有较高的遗传稳定性外，在诸多的生物大分子中，比蛋白质等具有较高的化学稳定性。一、DNA遗传标记技术的方法及原理1、限性内切酶酶切片段长度多态性(RFLP)2、聚合酶链式反应（PRC)3、随机扩增多态性DNA(RAPD)4、PCR扩增的特定片段的限制性位点分析(PCR-RFLP)5、DNA测序方法(DNA)二、DNA分子遗传标记技术在生药鉴定中的应用1、在植物进化、分类、鉴定中的应用主要依据形态特