外源基因表达产物的分离纯化.ppt

亲和双方吸附能力很强，可以用专一的化学方法裂解配基与载特殊性洗脱体的连接键，获得的配基-蛋白络合物后，再除去配基。第56页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三4.膜分离膜分离的基本原理分离膜的主要性能影响膜分离的因素第57页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三膜分离的基本原理膜分离是利用膜的选择性，以膜的两侧存在一定量的能量差作为膜分离的基本定义推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移速率不同而实现的分离。依据滤膜孔径和物质粒子的大小而达到物质分离的目的第58页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三分离效率高膜分离的特点不涉及相变，能耗低，运行成本低膜分离为单纯物理变化，无二次污染第59页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三分离膜的选择通透性：是物质分离的第一机制膜分离过程的重要参数膜分离过程的推动力：静压力差、浓度差、电位差物质通过分离膜的速度：是物质分离的第二机制第60页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三根据分离膜膜内平均孔径、推动力和传递机制不同，膜分离可膜分离的主要类型反渗透（ReverseosmosisRO）透析（DialysisDS）分成下列几类：超滤（UitrfiltrationUF）微滤（MicrofitrationMF）电渗析（ElectrodialysisEI）第61页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三透析半透膜袋蛋白质溶液透析液磁棒磁力搅拌器透析是利用蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐单糖等分开。常用的半透膜：?玻璃纸（赛璐玢纸，cellophanepaper）?火绵纸（赛璐玎纸,celloidinpaper）?其他改型纤维素材料第62页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三按照分子大小进行分离。分离取决于透析袋截留的分子量。透析液浓缩的蛋白混合样品透析袋开始透析处于平衡状态第63页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三反渗透（ReverseosmosisRO）反渗透其主要原理是在高于溶液渗透压的作用下，使其它物质溶解盐类、胶体、微生物、热源、有机物等，因而主要用于海水、不能透过半透膜，而将这些物质与水分离开来，有效地去除水中的苦咸水淡化和产纯水制备等方面第64页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三超滤（UitrfiltrationUF）超滤是一种根据高分子溶质之间或高分子与小分子溶质之间相相应的截留分子量范围从500到100万左右。对分子质量的差别进行分离的方法。筛分孔径范围1nm-0.1mm，第65页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三超滤第66页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三分离膜的基本性能分离膜是膜分离技术的核心，分离膜的性能主要包括分离透过性、耐酸碱性、抗氧化性、抗微生物降解性、亲水性、疏水性、电性能和化学物理性能两部分。其中，化学物理性能主要涉及到耐热性能、毒性、机械强度等。膜的化学物理性能第67页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三微滤膜 0.025-14mm反渗透膜 0.0001-0.001mm超滤膜 0.001-0.02mm纳米过滤膜 平均孔径2nm膜的分类按膜的孔径大小分类：第68页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三对称性膜 膜截面上的孔道结构均匀不对称性膜 由表面活性层（超薄层）和惰性层（支撑层）构成按膜的结构分类： 传质阻力大，透过通量低，易污染、难清洗 传质阻力小，透过通量高，被广泛使用第69页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三(2)样品进柱为了达到满意的分离效果，进样量一般为介质交换容量的10-20%为了避免进样溶液中的离子强度过高，样品浓度不宜太高交换容量：离子交换剂中全部可交换的离子或功能基团的总数第24页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三离子交换层析的基本操作(3)样品洗脱恒定洗脱阶段洗脱梯度洗脱102030405060708090分子浓度离子强度pH值第25页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三1.平衡阶段:离子交换剂与反离子结合2.吸附阶段：样品与反离子进行交换3、4.解吸附阶段：用梯度缓冲溶液洗脱，先洗下弱吸附物质，后洗下强吸附物质5.再生阶段：用原始平衡液进行充分洗涤，既可重复使用12345原始缓冲溶液的反离子样品溶液