DB63T 1002-2011马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范.docx

ICS65.020.01B.16

青

海省地

DB63

方标准

DB63/T1002—2011

马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范

2011-06-14发布

2011-07-01实施

青海省质量技术监督局发布

I

DB63/T1002—2011

前言

本规范的编写符合GB/T1.1-2009的要求。

本规范由青海省农林科学院提出并归口。

本规范起草单位：青海省农林科学院植物保护研究所。

本规范主要起草人：郭青云、王信、叶广继、朱海霞、程亮、姚强。

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DB63/T1002—2011

马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范

1范围

本规范规定了马铃薯品种(系)的试验地环境、参试质量和菌株选择、栽培技术、室内抗性鉴定方法和抗病性评价。

本规范适用于马铃薯品种(系)晚疫病的室内抗性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

DB63/T514青海省旱地马铃薯栽培技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本规范。

3.1

抗病性鉴定EvaluationofDiseaseResistance

是评价寄主品种、品系对特定病害抵抗或感染程度。

3.2

离体叶片鉴定EvaluationofLeafinVitro

将马铃薯品种(系)的叶片从植株上取下，经室内培养、人工接种而进行的抗性水平鉴定。3.3

对照感病品种ControlAffectedVariety

用于鉴定试验中的本地易感马铃薯品种。目前常用的感病品种有：大西洋、夏波蒂、Favorita。3.4

脱毒马铃薯种薯Virus-FreeSeedPotato

去除马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)马铃薯等主要病毒的马铃薯种薯。

3.5

抗性评价Evaluationofresistance

根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的定性描述。

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DB63/T1002—2011

4仪器、试剂及材料

4.1仪器

生物显微镜、光照培养箱、超净工作台、生化培养箱、冰箱、消毒锅、移液器、烧杯、培养皿(90mm)、不锈钢打孔器(5mm)、接种针、血球计数板和直尺。

4.2试剂

琼脂、75%酒精、蔗糖。

4.3材料

黑麦。

5试验地环境、参试马铃薯质量和菌株选择

5.1试验地环境

试验地选择在远离50m马铃薯种植区的区域。

5.2参试马铃薯品种(系)选择

选择薯形整齐、纯度高、健康的脱毒马铃薯。

5.3品种(系)田间种植数量

每品种(系)种植10株以上。

5.4菌株的选择

选择青海省优势马铃薯生理小种2个—3个进行接种。青海省马铃薯晚疫病菌优势生理小种有：3，4,10号、3,10号和3号。

6栽培技术

按DB63/T514执行。

7室内抗性鉴定方法

7.1培养基制备

7.1.1滤纸培养基

直径90mm的滤纸2张放入直径为90mm的培养皿中，加蒸馏水润湿，但无积水，备用。

7.1.2黑麦培养基

用蒸馏水浸泡60g黑麦24h，高压滤灭菌20min，4层纱布过滤，加入18g/L琼脂，20g/L蔗糖，蒸馏水定容至1000ml，湿热灭菌，在121℃高压灭菌锅湿热灭菌20min后备用。

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DB63/T1002—2011

7.2取样

7.2.1取样时间

待植株生长至8片-10片复叶后进行取样。

7.2.2取样方法和数量

在每个品种(系)的各个植株中随机采集小叶叶片30片。

7.3菌种繁殖和菌液制备

7.3.1繁殖

将采回的病叶流水冲洗10h-12h，晾干后在超净工作台紫外杀菌30min。选择易感晚疫病马铃薯品种夏波蒂的块茎，75%酒精消毒后在超净工作台上将块茎中间切一深槽，将病叶夹入槽内，用灭菌报纸包好，室温黑暗处6d-10d，待薯块表面出现典型晚疫病症状，无菌条件下取3小块-4小块发病薯块放入无菌培养皿中保湿培养4d-7d，待菌丝长出，挑取少量菌丝于黑麦培养基上18℃黑暗培养，待菌丝呈放射状生长，在菌落边缘切取有单菌丝的培养基放在黑麦培养基上18℃黑暗培养。

7.3.2菌液制备

用接种针挑取黑麦培养基上的菌丝体和孢子囊装有无菌水的烧杯中，生物显微镜镜检，用血球计数板记