液相色谱方法开发与应用培训班基础知识.ppt

岛津液相色谱方法开发及应用培训

---液相色谱基础知识;免费咨询电话800-810-0439

400-650-0439

维修部（北京）

（上海）

020广州）

分析中心（上海）

零配件订购（北京）

（岛津技迩）

;1969 GPC系统开发

1972 LC-1（LC-830）销售＜及DuPont签订许可合同后制造销售＞

1978 LC-3A系列销售＜CDQR方式的单柱塞型送液单元为特征＞

1981 LC-4A系列销售＜内置微型计算机的全自动HPLC＞

1982 LC-5A系列销售＜世界上首创的微量型LC对应HPLC＞

1984 LC-6A系列销售＜世界上最早的积木型HPLC、现在的HPLC的前身＞

1991 LC-10A系列销售＜世界上最早采用微冲程送液单元和减低噪音技术的检测器＞

1997 LC-VP系列销售＜采用有效性支持功能的积木型HPLC＞

LC-2010销售＜追求性能和操作性更加完善的一体型HPLC＞

LC-20AProminence销售＜为分析实验室带来革新的HPLC＞

2006ProminenceUFLC利用常规HPLC实现超快速分析

2008 ProminenceUFLCXR超快速、高分离度实现高通量分析

2010 LC-30ANexeraUHPLC超高效液相色谱

;岛津UFLC遍布五大洲;LC-20AProminence;液相色谱分离原理;吸附色谱;流动相

常使用烷烃为底剂，加入适当的极性调整剂。溶剂极性越大，洗脱能力越大。

注意：不能使用含水的流动相，因为硅胶遇水会失活。（微量水可改善拖尾状况，有时用水作减尾剂）;分离物质

对中等分子量的油溶性样品可获得最佳分离，例如油品、脂肪、芳烃等

对具有不同极性取代基的化合物或异构体有较好的选择性

但对于强极性或离子型的化合物会产生不可逆吸附。

对同系物分离能力较差

优点：样品负载能力大

稳定性好（pH＝3-8）;液液分配色谱;键合相色谱

－正相液相色谱;

胺基柱：极性强，具有碱性。

可在酸性水溶液中作弱阴离子交换剂，分离酚、羧酸、核苷酸。

及糖分子中的羟基作用，可分离单糖、二糖、多糖。

注意：胺基柱不能分析含有羰基的化合物（如醛、酮、还原糖等，流动相不能用丙酮）

;腈基柱：中等极性，分离选择性及硅胶类似，但保留值比硅胶低。

对酸性、碱性样品可获得对称峰。

对含双键的异构体或双键环状化合物有良好的分离能力。

芳硝基柱：弱极性

对芳香族化合物及多环芳烃有良好的分离选择性;二醇基柱：弱极性

可分离有机酸及其共聚物。

也可以作为分离蛋白质的凝胶过滤色谱的固定相

醚基柱：弱极性

可分离能形成氢键的化合物，如酚类和硝基化合物

也可以作为分离蛋白质的凝胶过滤色谱的固定相

;反相液相色谱流动相极性大于固定相极性

分离机制：疏水性;反相液相色谱

固定相：键合的烷基或苯基等非极性固定相

流动相：水、有机溶剂、缓冲液

键合相链越长、疏水性越强，溶质的保留值增大

流动相表面张力越大、介电常数越大、极性越强，溶质及键合相的作用越强，流动相的洗脱能力越差，溶质保留值越大。

溶质的极性越弱，疏水性越强，保留值越大。;分离物质：能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物

烷基柱（C8、C18）

可分离中等极性的化合物，溶于水的高极性化合物，如：小肽、蛋白质、甾族化合物（类固醇）、核碱、核苷、核苷酸、极性合成药物等

苯基柱（-C6H5)：

可分离非极性至中等极性的化合物，如：脂肪酸、甘油脂、多核芳烃、酯类（邻苯二甲酸酯）、脂溶性维生素、甾族化合物（类固醇）、PTH衍生化氨基酸等。;1、稳定性

正相键合相的稳定性要小于反相键合相

反相键合相使用pH为2-8，pH8.5会引起基体硅胶溶解

2、重现性

同一种类型的键合相，因厂家不同、、生产批号不同，会

表现不同的分离特性，表现为重复性差

3、键合相色谱柱的再生

吸附、缔合等作用使柱效降低

正相色谱柱再生：1:1甲醇-氯仿

反相色谱柱再生：甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺、0.01mol/L无机酸（硫酸pH2）;键合相色谱

－流动相的选择;离