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肉桂醇脱氢酶(CAD)活性检测试剂盒(微量法)
产品货号:BA1963
产品规格:100T/96S
产品简介:
CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一,催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成与之相应的肉桂醇。该
酶多存在于高等植物、酵母、菌类中,研究该酶可以探讨多生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减
少水果石细胞含量提高其品质提供依据。
CAD催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下测定NADPH消耗速率,即可反映CAD活性。
CAD
CinnamicAldehyde+NADPH(340nm)>CinnamicAlchRNADP"
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增
加样本量进行检测。
产品组成:
试剂名称规格保存条件
提取液液体120mLxl瓶2-8°C
试剂一粉剂XI瓶-20°C
试剂二液体XI瓶2-8°C
试剂三液体25mLxl瓶2-8°C
溶液的配制:
1.提取液:内含不溶物,使用前摇匀。
2.试剂一:临用前加入5mL试剂三溶解。可溶解后分装-20°C保存,避免反复冻融。
3.试剂二:液体置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入15mL乙醇充分混匀,配好后2-8°C保存。
4.工作液的配制:将试剂一、试剂二、试剂三按1:1:2(V:V:V)的比例配制工作液,工作液现用现配。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、
冰、乙醇和蒸馅水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5〜10的比例(建议称取约0.1g组织,加入ImL提取液(加
入前摇匀))进行冰浴匀浆,然后10000g,4°C,离心lOmin,取上清置于冰上待测。
2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体
积(mL)为500〜1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入ImL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,
功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);10000g4°C离心lOmin,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,紫外分光光度计蒸馅水调零。
2.操作表:在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂:
试剂名称(UL)空白管测定管
样本-20
蒸馅水20-
________工作液180180_______
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂,充分混匀后于
340nm处测定10s时的吸光值Al,迅速置于25°C水浴或培养箱5min(酶
标仪有控温功能可将温度调至25°C),拿出迅速擦干测定5minl0s时的
吸光值A2,计算AA测定管二A1测定-A2测定,AA空白管二A1空白-A2空
白,-A=AA测定管-AA空白管(空白管只需做1-2次)。______________
三、CAD酶活计
A
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