薄层色谱扫描法.ppt

三、介绍CAMAG薄层扫描仪第23页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三1、基本原理日本岛津生产的CS系列仪器瑞士CAMAG公司的薄层扫描仪基本原理：就是用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量的目的。第24页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三关于薄层色谱扫描法第1页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三

一、薄层色谱扫描法简介二、影响薄层扫描定量的因素三、介绍CAMAG薄层扫描仪第2页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三一、薄层色谱扫描法简介第3页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三1、简述

薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后产生的荧光强度。所得到的图谱及积分数据可用于药品的鉴别、检查及含量测定。第4页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三

中药材：山豆根、槲寄生、女贞子、牛黄、两面针、黄连等；中成药：六味地黄丸（浓缩丸）、元胡止痛片、清肺消炎丸、二妙丸、二至丸、九分散等;第5页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三2、检测方法(1)吸收法:扫描时测定薄层板上的样品斑点对光吸收强度的方法。(2)荧光法:测定样品斑点经激发后产生的荧光强度的方法。(3)荧光淬灭法:利用某些化合物减弱吸附剂中荧光剂的紫外吸收强度而进行定量的方法。由于薄层板各部分荧光强度不均匀,对定量不太适用,而是便于斑点的定位。第6页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三3、测量方式(1)透射法：测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。(2)反射法：样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法。第7页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三4、测光形式(1)单波长扫描：使用一种波长的光束对薄层进行扫描。适用于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。(2)双波长扫描：用测定波长和参比波长分别扫描薄层后，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，能显著改善基线的平稳性。操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。第8页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三5、扫描方式(1)线性扫描：用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向做单向等速扫描。适于形状较规则斑点的扫描。在进行荧光测定时一般只用线性扫描。(2)锯齿扫描：使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行往复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。第9页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三6、定量方法(1)外标法：如果标准曲线经过原点，可用一点法校正；如果不通过原点，采用二点法校正，必要时用多点校正法。测定时，供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，每份供试品溶液点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于2个，其计算结果的相对平均偏差不得大于5%。计算公式:C=kA+b(kA+b)×稀释倍数点样量×称样量(2)内标法：将内标加入供试品溶液和对照品溶液中以峰面积的比值为定量依据.由于内标物的选择比较困难，目前应用较少。内标物：a.在样品溶液中加入一种在样品溶液中不存在的，b.性质与被测物质类似且又与样品中被测成分得易分离的纯化物，第10页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三7、系统适用性试验（1）检测灵敏度：指用于限量检查时，被测成分能被检出的最低量。（2）分离度：用于限量检查或含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度,应大于1.0。（3）重复性：指同一薄层板上同一供试品溶液相同浓度的数个斑点，扫描结果的偏差。不显色直接扫描，相对标准偏差应不大于3.0%，显色后扫描，相对标准偏差应不大于5.0%。第11页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三二、影响薄层扫描定量的因素

第12页，讲稿共34页，2023年5月2日，星期三（一）吸附剂性能及薄层质量1、吸附剂：（1）吸附剂颗粒大小，分布均匀程度能影响分离度和检出限度。小颗粒且分布均匀的吸附剂，分离度好，灵敏度高。（2）吸附剂的含水量影响薄层活度，如果大气湿度过大，吸附剂含水量过高，导致薄层活度过低，就会影响