实验一双向琼脂扩散试验.ppt

第1页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第2页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第3页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三γμδαε第4页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第5页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三实验目的：了解双向琼脂扩散的原理和用途。掌握抗体效价的测定方法。观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。第6页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。实验原理第7页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第8页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。双向琼脂扩散试验第9页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。?第10页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三免疫学及免疫学检验A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜Ab；D：扩散率近似，浓度Ag＞Ab；E：浓度Ag＞Ab，扩散率Ag＞Ab；F：浓度Ag＜Ab，扩散率Ag＜Ab沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系第11页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三免疫学及免疫学检验(1)沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。(2)沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。(3)沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。(4)沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。A1：待检抗原；A2：标准抗原第12页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三抗体效价滴定用梅花型孔，中间放抗原，周围孔放下不同稀释度的相应抗体，以出现沉淀线的最高稀释倍数为该抗体的效价。免疫学及免疫学检验第13页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三材料与试剂1．琼脂粉2．平皿3．打孔器4．生理盐水或其他缓冲液5.抗原、抗体第14页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第15页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三操作方法1．称取一定量的琼脂粉，按1.5%的比例加入生理盐水或缓冲液，煮沸融化。2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径3－5mm）打成梅花形孔图。第16页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三第17页，讲稿共23页，2023年5月2日，星期三**将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。**吸取样品加入孔内(约15ul)，注意不要产生气泡，以加满为度。加少了，影响反应程度，加多了，易溢出，也影响反应结果。