霉菌的形态观察_2.docVIP

霉菌的形态观察

一、【实验目的】

1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法

2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征

二、【实验原理】

1、霉菌

霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3~10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

2、观察方法

观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。

3、载玻片培养观察法（小室培养法）

用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

三、【实验器材】

1、菌种：曲霉(Aspergillussp.)，青霉，根霉(Rhizopussp.)，毛霉（Mucorsp.），培养7d的马铃薯琼脂平板培养物

2、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）

3、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等

四、【操作步骤】

1、载玻片培养观察法（小室培养法）

（1）、培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包扎后于110℃灭菌20~30分钟，烘干备用。

（2）、琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6~7ml注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。通过无菌操作，用解剖刀将其切成1cmx1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块)。

（3）、接种：通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。

（3）、培养：通过无菌操作，在培养小室中的圆滤纸上加2～3ml灭菌的20%的甘油（用于保持平皿内的湿度)，盖上皿盖，27℃正置培养一周。

（4）、镜检：根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。

五、【注意事项】

1、载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少，同时尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。

六、【实验结果及绘图】

菌种

曲霉

根霉

毛霉

青霉

形态特征

营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。

菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。

菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。

菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。小梗顶端有孢子。

四种霉菌形态特征表

【绘图】

青霉菌10x10青霉菌10x10

【附表】马铃薯培养基配方（PDA）

马铃薯

200g

葡萄糖（蔗糖）

20g

琼脂

22~25g

水

1000ml

PH

自然

马铃薯去皮，切成块煮沸20~30min，然后用1层及6层纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至所需量，110℃灭菌20~30min