地骨皮甲素抗NMDA兴奋性损伤神经保护活性研究.docxVIP

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目录

TOC\o1-3\h\z\u第一部分地骨皮甲素抗NMDA兴奋性损伤神经保护活性 1

摘要 1

ABSTRACT 2

缩略语表 3

AbbreviationKeys 3

第一章前言 4

1.1NMDA受体概述 4

1.2NMDA受体与相关疾病 5

1.2.1缺血性脑卒中 5

1.2.2亨廷顿病 5

1.2.3阿尔兹海默病 5

1.2.4抑郁 5

1.3NMDA受体在神经元存活及细胞死亡中的双重作用 6

1.3.1GluN2A-NMDA受体与GluN2B-NMDA受体：亚基假说 6

1.3.2GluN2B下游信号通路蛋白 7

1.4地骨皮甲素的药理及前期研究进展 9

第二章地骨皮甲素在NMDA兴奋性毒性模型的保护作用及机制 10

2.1实验材料 10

2.1.1实验动物 10

2.1.2试药及试剂 10

2.1.2主要试剂的配制 12

2.1.3主要仪器 13

2.2实验方法 13

2.2.1大鼠大脑皮层神经元原代培养 13

2.2.2NMDA损伤模型的建立 14

2.2.3MTT法测定地骨皮甲素对细胞存活率的影响 14

2.2.4MTT法测定地骨皮甲素对NMDA损伤的皮层神经元存活率的影响 14

2.2.5MTT法PI3K/AKT抑制剂wortmannin对KuA神经保护活性的影响 14

2.2.6Hoechst33342染色观察地骨皮甲素对NMDA损伤的皮层神经元凋亡的影响 15

2.2.7KuA对NMDA损伤皮层神经元LDH释放的影响 15

2.2.8Westernblot法测定地骨皮甲素对NMDA损伤的皮层神经元凋亡相关蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白及GluN2A、GluN2B亚基蛋白表达的影响 16

2.2.9数据统计 18

2.3实验结果 18

2.3.1大鼠皮层神经元的培养与纯度鉴定 18

2.3.2NMDA损伤模型的建立 19

2.3.3地骨皮甲素对皮层神经元细胞存活率的影响 19

2.3.4地骨皮甲素预处理提高NMDA损伤神经元的活性 20

2.3.5地骨皮甲素对NMDA损伤的皮层神经元LDH释放量的影响 20

2.3.6地骨皮甲素对NMDA损伤的神经元凋亡的影响 21

2.3.7地骨皮甲素对凋亡相关蛋白表达的影响 22

2.3.8地骨皮甲素的神经保护活性需要PI3K/AKT信号通路的激活 23

2.3.9地骨皮甲素对GluN2A及GluN2B亚基蛋白表达的影响 24

2.4讨论 25

第三章全文结论 27

参考文献 28

第二部分临床实践与药历分析 33

药历1支气管肺炎合并病毒性脑膜炎患儿的药学监护 34

药历2不稳定性心绞痛患者的药学监护 42

药历3消化道出血患者的药学监护 52

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第一部分地骨皮甲素抗NMDA兴奋性损伤神经保护活性

摘要

NMDA受体为中枢神经系统中重要的离子型谷氨酸受体，参与突触可塑性、记忆形成、情感调控及神经系统发育等重要功能。然而，GluN2B-NMDA受体过度激活导致的兴奋性毒性却是脑卒中、抑郁及神经退行性疾病的病理基础。因而，开发作用于GluN2B-NMDA受体的抑制剂成为治疗众多神经系统疾病的研究热点之一。

目的：评价地骨皮甲素对NMDA导致的兴奋性毒性的作用及其潜在作用机制，为神经保护剂的开发提供理论基础。

方法：本研究在原代皮层神经元上建立NMDA兴奋性损伤模型。通过MTT及LDH实验评价地骨皮甲素对细胞损伤的作用。通过Hoechst33342染色探讨地骨皮甲素对神经元凋亡的作用。通过Westernblot试验评价地骨皮甲素对凋亡相关蛋白、GluN2A、GluN2B亚基蛋白表达及PI3K/AKT信号通路激活的影响。

结果：200μMNMDA损伤皮层神经元30分钟导致细胞存活率下降至70%左右，此条件被用于后续试验中兴奋性损伤的建立。地骨皮甲素预处理可抑制细胞损失、LDH释放及神经元凋亡。地骨皮甲素可提高Bcl-2,procaspase-3的蛋白表达并降低Bax,cytochromec,p53的表达。并且，地骨皮甲素预处理可逆转NMDA导致的GluN2B亚基的表达增加、PI3K/AKT信号通路的失活。

结论：地骨皮甲素通过调控凋亡相关蛋白、GluN2