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微生物检测专题知识讲座微生物检测专题知识讲座第1页微生物因为体积小、质量轻、适应性强等特点，在自然界中分布很广。但环境条件不一样，微生物种类和数量也不一样。微生物检测专题知识讲座第2页第一节土壤中微生物一、土壤是微生物生活良好环境土壤中生态环境条件——营养（有机质丰富）、水分（有一定含量）、空气（含氧气）、酸碱度（pH5.5~5.8，适宜）、渗透压（0.3~0.6MPa，等渗或低渗环境）、温度条件（较恒定）和表面保护层。故土壤是微生物大本营，也是人类最丰富“菌种资源库”。微生物检测专题知识讲座第3页二、土壤中常见微生物类群土壤中微生物主要种类有：细菌（占70～90％）108放线菌107丝状菌106酵母菌105藻类104原生动物103微生物检测专题知识讲座第4页三、土壤中微生物数量与分布不一样类型土壤中微生物种类和数量是不相同。调查结果表明，有机质含量丰富黑土、草甸土、磷质石灰土等微生物数量多；栗钙土、盐碱土、红壤土、砖红壤土微生物数量较少。（见表1）不一样土层深度土壤中微生物数量和种类也不一样。普通土壤表层微生物数量最多，伴随土层加深，微生物数量逐步降低。微生物检测专题知识讲座第5页表1我国各主要土壤含菌量(万/克干土)土类 地点 细菌 放线菌 真菌暗棕壤 黑龙江呼玛 2,327 612 13棕壤 辽宁沈阳 1,284 39 36黄棕壤 江苏南京 1,406 271 6红壤 浙江杭州 1,103 123 4砖红壤 广东徐闻 507 39 11磷质石灰土西沙群岛 2,229 1,105 15黑土 黑龙江哈尔滨 2,111 1,024 19黑钙土 黑龙江安达 1,074 319 2棕钙土 宁夏宁武140114草甸土 黑龙江亚沟 7,863 29 23嵝土 陕西武功 951 1,032 4白浆土 吉林皎河 1,598 55 3滨海盐土 江苏连云港 466 41 0.4微生物检测专题知识讲座第6页四、土壤微生物分离和计数1、取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处土壤。盛土容器应是无菌。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。土样取回后应尽快投入试验，同时取10-15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。微生物检测专题知识讲座第7页2、倒平板熔化已灭菌上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。微生物检测专题知识讲座第8页3、编号取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。4、分装无菌水按无菌操作用5mL移液管分别吸收4.5mL无菌水于编号各无菌空试管中。微生物检测专题知识讲座第9页5.制备土壤稀释液称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠三角瓶中，振荡10～20min，使土样中菌体、芽孢或孢子均匀分散，此即为10-2浓度菌悬液。用无菌移液管吸收悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次、摇匀，此即为10-3浓度。一样方法，依次稀释到10-7。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行，整个稀释过程如图。微生物检测专题知识讲座第10页微生物检测专题知识讲座第11页6、混菌法接种细菌分离分别准确吸收10-7，10-6，10-5三个稀释度菌液1mL；放线菌分离分别吸收10-5，10-4，10-3三个稀释度菌液1mL；霉菌分离分别吸收10-4，10-3，10-2三个稀释度菌液1mL；酵母菌分离分别吸收10-6，10-5，10-4三个稀释度菌液1mL，对号加在已凝固平板上，同时做空白对照，空白对照只加培养基，不接种菌液。7.培养将涂布后平板上倒置于恒温箱中，细菌在37oC下培养24～48h，霉菌在28oC下培养3～5d，放线菌在28oC下培养5～7d，酵母菌30oC下培养2～3d,观察结果。微生物检测专题知识讲座第12页8.计数选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数靠近稀释度平皿计数，通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之间平皿，霉菌选菌落数在10～100之间平皿，最终换算成每克干土所含菌数。同一稀释度平均菌落数×稀释倍数每克干土含菌数=1－土壤含水量％微生物检测专题知识讲座第13页第二节水体中微生物一、水体是微生物天然生境不论是海水还是淡水水体中，都有着微生物生长所必需营养，有如土壤所具备条件。微生物检测专题知识讲座第14页二、水体中微生物数量和分布1.污染淡水处于城镇等人口聚集地域湖泊、河流等淡水。108~109个/