基因工程在环境学中的应用.docx

基 因 工 程 在 环 境 学 中 的 应 用

(5)含有西个宿含笳甚的簇状结构，即含有两个结构坡，且其分子内不含二皎键，

臣．2.2 扭物：金屈硫扭白的功能

自金屈硫伍白(MT)被发现至今，对其功能的定论一直都存在石较多的争议．就目前来讲，对植物MT功能的研究，绝大多数邵是根据其表达行为推驸而来．据推剌妒其功能可能涉及以下儿个方面即能够消除自由基、解除项金屈离子的荔也和参与彶昼元紫的运谕和供给以维持细胞内环境的总态等．

(I)消除自由甚

1965年，lllornallcyPJ相Va过KM”“经过研究发现，金屈硫蛋臼(MT)可以消除出

于辐射而形成的羚自山基.( OH)，并且，当其与谷胱甘肚(G$H) 作用后，MT能得

以再生。自此，引领了人们对MT与自由甚关系这一新领域的不盺矶究与探索．张艳(.116

的实验叨究 表明 ，MT具有极其侍殊的化学结约，正因如此它是消除体内自由括胧）｝段强的一种蛋白质，其活除泾自由县(?OH)的睦力约为SOD的1月倍左右，而沿除氧

日由基(.,o) 的能力约是GSH的25倍左右．面且，它具布较强的抗钮化活性，可以作

为体内补体抗氧化剂．

解除亚金屈离子的寄害

佥展硫蛋白(MT)之所以能够觯除垂金屈离子的祗告作用，主要依据是MT宫含半胱惯酸，其含有的分在某{SH〉能移与多种有毋金屈离子进行强东的络合反应。例如，MT能够解除P忙、Hg2+、Cd2、Ag今、矿 湘 O ”等的 话害，并且，酘够将其悖出体外．棺物MT的半觥冤酸的排伯方式和所含的数昼与动物MT相比差异很大，因此， 二者与重金质的亲和力以及与贡令屈团子的结合能力也有所不同．很多头验研究1$158l表明．植物

MT基因昨 长达受袱令屈离子的彩咱作用较大．据此推剧，梢物MT可能在络合觉令属离子和佃除项佥屈离子的蓝告等方而具有广阔的应用前果．

参与微费笐崇的运输和供给

体内的微品元圣多数是金屈元烘，而MT又能够结合多种金屈离子1 因此，MT在微鱼元索的运输和供给方而会发挥匝要的作用，许多探索性研究也表明了这一点。

RCFoley和ZMli:aI)砰许“通过表达蚕豆MTI心□MTl.b 的实验研究表明，在佥属离子浓枝较低时，MT作为金屈离于的配体，能够较好地维持内环境中金屈岚子的稳定水平 千此问时 能够有效地将佥展离子运输和供给到所需要的组织，此外，ILHYu和M

Umeda等1例研究发现．水稻胚旮尤其是茎节部分．riceMT的表达炕非常庙，约是叶片中的))0倍左右，由此推测，MT可姥参与了将特定的金屈离于，通过维岱束运输到棹和小穗的活动，而这一点与riceMT在小穗中的环表达危相符合，趼究人员还给出了另外一种可能性，认为riceMT可院将金屈辅助因子运轮到脱辅基的酌上，从而有效地激活了的参与代谢反应．

1.5.3 枣金屈硫亟臼县因工程祖(pGEX为MT-B)

该菌是邪彩云等1，以从枣树的心＼A文库中获得的基因SpoLIl-MT为楼板，用PCR方法扩增出IIT基因225bp特异片段，将共亚克隆入pBluescipllIJSK-r载休r用限制性内切梢B或 I]和出nd」II分别酌切蜇组pBluesdp工llSJ(一T攸粒和原 核表达载体PET28a（十），然后将盯基因片段和表达载体PET鸥a(+）通过T40NA连接酌进行定向连换，用限制性

内切酌朊圳II和IIindlIl葫切和PCR方法双重 鉴定重组表达质粒．

具伈方注如下：

(］）MT片段的仪汛扩准、纯化

以克院质粒SpoIl.MT为模板，用PCR扩均法扩1付出MT的DNA片段。PCR扩坻条件

如下94它Sn11i1预变性，9.4CJOs、5.2C30s、72-C!min,35个傩坏，冉？2它延伸5m，.n.

取0.5μg的PCR的产物进行琼脂糖祛胶电泳分析确认片段后，其余lCR产物用DNA纯化试剂盒纯化（按烈试剂说明悚怍）．一2O.C保存。

(2)中间克格载体的(!)1lucd111nlSK-MT构建

诚裂减法提取载体pBlue:.1cigi1IISK质粒．进行琼脂糖淏胶电泳确认后，取］5μg的质粒用SmalI进行拍酗切，少量电泳证明酮切完全后，将酶切体系纯化后进行

pBluescip诅SK－谭 体的和j备．然后用DNA连抉蚐将制备好的pBlu岱ciplllSK－下钱