多粘芽抱杆菌铜绿假单胞菌的培养及菌体浓度测定.docx

多粘芽抱杆菌铜绿假单胞菌的培养及菌体浓度测定

3·.4 菌体浓度测定的方法

3..4.] 平板菌落计数法

3A耐L1平板菌落计数法的基本原理

当一定浓度的茵液稀释到足够大的倍数时，溶液中的苗种以单个游离状态存在。将菌种以单个游离状态存在的菌液在培养基培养长出苗落，可以认为每一个菌落是由一个菌种生长而成．因此计算固体培养基中的菌落数便是菌种数p.]],(I,

3A..l.l平板菌落计数法的实验方法

(l)稀释水样

将1瓶90ml和8试管9m]无菌水排列好，按10·1, 10 气lO气10久

10气10女IO气 !o·8.... ．lO，啊

依次编号，在无菌操作条件下，用l0,ml无菌

移液管吸取1.0ml菌种培养液，置于90mJ无菌水中，手摇lO血n将样品混匀＂这就是10l 浓度的祥品令用l.ml无面移液管吸取mml 0·1 浓度的样品

于一试管9ml无菌水中，将移液管吸吹三次，摇匀，得l妒浓度样品咂同

样方法卞 依次稀释到lO？..3

(2) 计数

在无菌条件下，用无菌移液营吸取三个适宜浓度的稀释液lml加入无菌培养皿（每个浓度取三个祥）。倾入约l5ml已灭茵井冷却到约45它的营养琼脂培养基（未凝固的固体培养基）中平放于桌面迅速轻轻摇动培养皿，使样品与培养基充分混匀屯冷凝后成平板心平板倒置于37它恒温培养箱内培养24h计算茵落数[33l习

(3)茵落计数及报告方法

用肉眼观察，计笢平板上的菌落数4也可用放大镜和菌落计数器计数在记下同—浓度的三个平板的菌落总数，计算平均值，然后乘以稀释倍数，＇即得lml水样中的微生物总数，口各种不同恺况的计算方法如下；

（一）首先选择平均菌落数在30~300之间进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则平均该条件下茵落数，井乘以其稀释倍数a（例l)

表3-l 稀释度选择及茵落总数报告

例

次

不同稀释度的平均菌落数

两个稀释

度

菌落之比

函落总数

报告方式

、-

－

lO-I

l.O2

10，主

；］

l365

164

I

20

-

.

l64OO

i6OOO或16X]04

2.

2,760

295

156

189

29500

3OOOO或3.0XlO4

3

2,890

_

J

271

60

4,51

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I

,87000或，．8.7X104

4

无法计算

l650

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5

27

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5

270

270 或2,7X14t

6

无法计算

305 I

12

305的

31000或3.1Xl矿

（二）若有两个稀释度的平均菌落数均在30300之间，，且两者菌落总数之比大于2，则取两者之平均数，若小千2，则取其中较少的菌落总数日（例2和例3)

（三）若所有稀释度的平均数均大于300,则取稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数为报告结果。（例4)

（四]

）若所有稀释度的平均茵落数均少于30士则 取稀释度最低的平

均菌落数乘以稀释倍数为报告结果tjJ（例5）

（五）若所有稀释度的平均数都不在30~300之间，则应以最接近

3100或30的平均菌落数乘以稀释倍数为报告结果。（例6)

（六）在求相同稀释度的平均菌落数时生若其中一个平板上有极大片菌落生长时d则不宜采用．而应以无线状菌落生长的平板计算该稀释度的平均菌落数口若片状菌落约为平板的一半，而另一半平板上菌落分布很均匀，则按该半边平板上的菌落数计数，然后乘以2作为整个平板的菌落数口

（七）报告菌落计数结果时，菌落数在100以内按实际数报告，大于100时，取两位有效数字，而两位有效数字后的位数，以四舍五入法计算g为了缩短数字后面的笭数，可用IO为底数的指数来表示句报告菌落数为“无法计笲”时才应注明水样的稀释倍数”汇

3.4..2平板菌落计算的实验结果

P. 多粘芽抱杆菌的平板营、铜绿假单胞菌的平板菌落计算结果如表

3-2... 表 3－3

表3-2 P.多粘芽泡杆菌的平板菌落计算结果

不同

不同稀释度的菌落数

to-1

]o-11:

lO3

l＃平板 1 无法计算1

373

13

扭平板

无法计算

29

7

3＃平板

无法计算

2619

4

平均菌落数