糖类物质分析测定ppt课件.pptxVIP

第六章、糖类的测定;糖类是微生物的主要碳源。发酵生产中使用的糖类形式很多，使用最多的单糖是葡萄糖和果糖，是含有六个碳原子的多羟基醛或多羟基酮类，具有还原性。

发酵工业中应用最多的双糖是蔗糖和麦芽糖，发酵工业中应用最多的糖类原料是淀粉。糖类的测定在生产中非常重要，通过糖类的测定可以知道原料中淀粉的含量，了解发酵过程糖类消耗的情况，以及测定某些成品如淀粉酶、糖化酶的活力等。

。;糖类的定量测定有物理方法和化学方法等多种。

物理方法又有折光法、旋光法、比重法等。

化学方法主要利用还原糖的还原性，用氧化还原法和比色法进行测定，应用较普遍的有廉—爱农法、高锰酸钾容量法、碘量法等。容量分析法目前仍是糖类测定中普遍应用的方法。

还原糖的测定是测定的重点。;第一节、还原性糖的测定;1、提取;(1)含脂肪的原料;（2）含有大量淀粉和糊精;（3）含乙醇和二氧化碳的液体样品;（4)提取固体样品;（5）水果及其制品的提取掖应控制在中性。因为水果中含有有机酸，在酸性条件下

加热会发生水解。

(6)为避免糖类被酶水解的现象发生，可加入氯化汞。;2．提取液的澄清;(1)对澄清剂的要求;（2）常用的澄清剂;乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液：它是利用乙酸锌与亚铁氰化钾反应生成的亚铁氰酸锌沉淀来挟走或吸附干扰物质。这种澄清剂除蛋白质能力强，但脱色能力差，适用于色泽较浅，蛋白质含量较高的样液的澄清，如乳制品、豆制品等。;硫酸铜和氢氧化钠溶液： 一般是用硫酸铜溶液和氢氧化钠溶液组成的混合液进行澄清，在碱性条件下，铜离子可使蛋白质沉淀，适合于富含蛋白质的样品的澄清。;此外，可作为可溶性糖类提取液的澄清剂的还有碱性乙酸铅、氢氧化铝溶液和活性炭。但碱性乙酸铅与杂质作用生成体积甚大的沉淀，可带走还原糖，特别是果糖，而且，过量的碱性乙酸铅可因其碱度及铅糖的形成而改变糖类的旋光性；氢氧化铝溶液只能除去胶态杂质，澄清效果差；活性炭吸附能力较强，能吸附糖类造成损失。这些缺点限制了它们在糖类分析上的应用。;澄清剂应根据样品溶液的种类、干扰成分的种类及含量加以???当的选择，同时还必须考虑到所采用的分析方法。

如用直接滴定法测定还原糖时不能用硫酸铜—氢氧化钠溶液澄清样品，以免样品溶液中引入铜离子；

用高锰酸钾滴定法测定还原糖时，不能用乙酸锌—亚铁氰化钾溶液澄清样品溶液，以免样品溶液中引入锌离子。;(3)澄清剂的用量;中性乙酸铅作为澄清剂

一般先向样品溶液中加入1—3m1乙酸铅饱和溶液(约30％)，充分混合后静置15min，向上层清波中加入几滴中性乙酸铅溶液，上层清

液中没有新的沉淀形成，说明杂质已沉淀完全，如有新的沉淀形成，就再混匀并静置几分钟，如此重复直至无沉淀形成为止。也可以用20％中性乙酸铅溶液。;用乙酸锌—亚铁氰化钾溶液做澄清剂时，用量一般是50一75m1样品溶液加入乙酸锌—亚铁氰化钾溶液各5ml。

用硫酸铜—氢氮化钠溶液作为澄清剂时，一般在50一75m1样品溶液中加入10m1硫酸铜溶液和4m1氢氧化钠溶液。;3．样品溶液除铅;二、还原糖的测定（Folin-热滴;生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠与铜的络合物，使氢氧化铜溶解：;酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：;反应终点用次甲基蓝指示剂显示。次甲基蓝是氧化能力较二价铜更弱的一种用氧化剂，故待二价铜全部被还原糖还原后，过量一滴还原糖立即使四甲基蓝还原．溶液的蓝色即消失：;反应终点本来应为氧化亚铜的红色，但在改良的廉—爱农法中，在斐林乙液中预先加入了亚铁氰化钾，使红色氧化亚铜与亚铁氰化钾生成可溶性的复盐，反应终点由蓝色转为浅黄色，更易观察；;2．试剂;3．测定步骤;(2)预备试验

准确吸取斐林甲、乙液各5mL，置入150mL锥形瓶中，加入V1mL试样稀释液(合葡萄糖量约为5—15mg)及适量的0.1％标准葡萄糖液，摇匀后加热煮沸， 在沸腾情况下以每两秒一滴的速度滴入标准葡萄糖液，至蓝色刚好消失为终点。记录消耗标准葡萄糖液的总体积V2mL。;(3)正式滴定

准确吸取斐林甲、乙液各5mL，置入150mL锥形瓶中，加入V1mL试样稀释液和(Vz—1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热煮沸，在沸腾状态下以每两秒一滴的速度滴入标准葡萄糖液，至蓝色刚好褪去为终点。

重复测定两份，取总消耗标准葡萄糖液体积的平均值VmL。;4．计算;5.说明;滴定至终点蓝色褪去之后，就不应再滴定，因四甲基蓝指示剂被还原褪色后，当接触空气时，又会被氧化重现篮色。

斐林溶液与还原糖之间的反应因受溶液碱性、加热湿度和时间以及副反应等影响，而没有严格的定量关系，不能由当量定律来求出试样中还原糖的含量，只能根据在相同实验条件下消耗相应的标准还原糖量或由严格相同的实验条件下得出的还原糖检索表上查得