过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法.docx

植物生理学实验报告

实验题目：过氧化氢酶活性的测定-紫外线吸收法

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实验原理和目的

HO在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性

二、实验器具和步骤

材料：海桐叶

仪器与用具：紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；

试剂：0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0、pH7.80.1mol/LH2O2

步骤：1.称取植物材料0.3g，加入0.1mo1/L磷酸缓冲液(pH7.0)6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以6000r/min离心15分钟，倾出上清液。

2.测定：取10ml试管2支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。

紫外吸收法测定HO样品液配置表

□_□

管号

S1

S2(对照)

粗酶液(ml)

0.2

0.2(ph7.8

PBS)

pH7.8磷酸(ml)

1.5

1.5

蒸馏水(ml)

1.0

1.0

测定:25°C预热后，逐管加入0.3ml0.1mol/L的HQ，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。

按下式计算酶活性。

结果计算：

以1min内A24°减少0.1的酶量为1个酶活单位(u)。

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)二AA24(*Vt/(0.1*t*FW*V

Vt一粗酶提取液总体积(ml)； 1)

V1一测定用粗酶液体积(ml)；

fW一样品鲜重(g)；

0.1一A40每下降0.1为1个酶活单位(u)；

t一加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。

三、 实验数据和作业

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=(1.546-1.526)*6/(0.1*2*0.3*0.2)=10

四、 数据分析

过氧化氢酶活性较低，可能是由于叶片采集时间过久。

五、 思考题

影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些？

答：叶片的选择，温度的变化，研磨是否充分，洗涤是否干净。

过氧化氢酶与哪些生化过程有关？

答：过氧化氢是一种代谢过程中产生的废物，它能够对机体造成损害.为了避免这种损害，过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质.

过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2,使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH.