第九章血脂及血浆脂蛋白检验演示文稿.ppt

聚乙烯硫酸（PVS）沉淀法空腹血清中主要含有HDL、LDL、VLDL。用聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚选择性地沉淀LDL，离心后上清液中韩HDL、VLD测定出上清液HDL-C和VLDL-C总和。同时测定血清总胆固醇含量。LDL-C=TC-（HDL-C+VLDL-C）本文档共89页；当前第62页；编辑于星期六\10点30分实验操作LDL分离于小离心管中加血清200uI和沉淀剂100uI，混匀，室温（20℃，不得高于30℃）放置15min，然后3000rpm离心15min，取上清液与血清同时测定胆固醇。取3支试管，按下表操作加入物（ml）标准管测定管1测定管2空白管标准液0.03--——上清液--0.03--—血清----0.03--蒸馏水--酶试剂2.00--2.00--2.000.032.00本文档共89页；当前第63页；编辑于星期六\10点30分酶测定法特点：常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。本文档共89页；当前第30页；编辑于星期六\10点30分原理胆固醇酯＋H2O胆固醇＋游离脂肪酸胆固醇＋O2胆烷-4-烯-3-酮＋H2O2H2O2＋4氨基安替比林＋酚醌亚胺＋4H2O本文档共89页；当前第31页；编辑于星期六\10点30分试剂与器材1、酶应用液2、参考血清3、器材试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、恒温水浴箱本文档共89页；当前第32页；编辑于星期六\10点30分实验操作取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管待测血清0.02——参考血清—0.02—蒸馏水----0.02酶应用液2.002.002.00本文档共89页；当前第33页；编辑于星期六\10点30分混匀，置于37℃水浴箱，放置15分钟，以空白管调零点，在510nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算测定管吸光度血清胆固醇（mmol/L）=------------------×参考胆固醇浓度（mmol/L）标准管吸光度参考范围3.10~5.70mmol/L本文档共89页；当前第34页；编辑于星期六\10点30分评价：主要缺点是：优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。本文档共89页；当前第35页；编辑于星期六\10点30分影响TC水平的因素①年龄与性别；②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高；③遗传因素；④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。【临床意义】病理性高TC血症：见于脂肪肝、肝脏肿瘤、甲状腺功能亢进严重糖尿病、动脉粥样硬化等。病理性低TC血症：见于肝脏疾病如急性肝坏死、肝硬化，甲状腺功能亢进，恶性贫血、溶血性贫血营养不良等本文档共89页；当前第36页；编辑于星期六\10点30分第三节血清三脂酰甘油测定本文档共89页；当前第37页；编辑于星期六\10点30分简介三酰酯甘油（TG）是由一分子甘油和三分子脂肪酸组成。每一分子三酰酯甘油含有2~3种不同的脂肪酸。本文档共89页；当前第38页；编辑于星期六\10点30分血清（浆）甘油三酯的测定方法气相层析高效液相层析红外分光光度法散射比浊法化学法酶法本文档共89页；当前第39页；编辑于星期六\10点30分基本操作：（一）化学法分溶抽提-乙酰丙酮显色法1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸