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p38p38?p38?p38?本文档共56页；当前第31页；编辑于星期日\22点16分LPS、UV刺激心肌细胞共聚焦显微镜大体扫描LPSControlUV本文档共56页；当前第32页；编辑于星期日\22点16分本文档共56页；当前第33页；编辑于星期日\22点16分细胞信号分子的三维结构分析本文档共56页；当前第34页；编辑于星期日\22点16分蛋白质三维结构分析对于揭示信号分子的功能的作用本文档共56页；当前第35页；编辑于星期日\22点16分本文档共56页；当前第36页；编辑于星期日\22点16分蛋白质与蛋白质相互作用的研究本文档共56页；当前第37页；编辑于星期日\22点16分PHTHSH3SH2KinaseBtkSH3SH2KinaseSrc蛋白激酶结构域本文档共56页；当前第38页；编辑于星期日\22点16分1、蛋白质结合实验本文档共56页；当前第39页；编辑于星期日\22点16分2、免疫共沉淀实验本文档共56页；当前第40页；编辑于星期日\22点16分FirstMilitaryMedicalUniversity细胞信号转导的技术方法公众微信号详解演示文稿本文档共56页；当前第1页；编辑于星期日\22点16分（优选）细胞信号转导的技术方法公众微信号本文档共56页；当前第2页；编辑于星期日\22点16分蛋白激酶磷酸化及其活性测定本文档共56页；当前第3页；编辑于星期日\22点16分蛋白激酶磷酸化的检测裂解培养的细胞获得裂解上清以免疫共沉淀法获得蛋白激酶SDS再加入蛋白激酶磷酸化特异性抗体以PhosphoAb-HRPWestern化学发光检测试剂盒测定蛋白激酶的磷酸化程度。本文档共56页；当前第4页；编辑于星期日\22点16分经典蛋白激酶活性分析实验流程以免疫共沉淀法获得蛋白激酶加入该激酶底物和?32-ATP，激酶使底物磷酸化放射自显影，确定磷酸化条带本文档共56页；当前第5页；编辑于星期日\22点16分以免疫共沉淀法获得蛋白激酶加入该激酶底物，激酶使底物磷酸化再加入底物磷酸化特异性抗体以PhosphoAb-HRPWestern化学发光检测试剂盒测定底物的磷酸化程度，进而推出蛋白激酶活性非放射性蛋白激酶活性分析实验流程本文档共56页；当前第6页；编辑于星期日\22点16分较传统激酶活性测定方法的优点无需接触放射性物质敏感度高：可以检测到每个磷酸化分子特异性：利用磷酸化特异性抗体可以进行位点特异性分析信噪比高低背景系统完整：提供一整套直接从细胞裂解液中测试酶活的试剂节约时间：由几天降到几分钟本文档共56页；当前第7页；编辑于星期日\22点16分02468101214051020306090120Time(min)RelativekinaseactivityDynamicprocessesofp38activationbyLPSinRAWcells本文档共56页；当前第8页；编辑于星期日\22点16分EffectofindividualMAPKpathwaysonPRAKactivityinintactcellsMKK7(D)GST-ATF2GST-ELK1MKK1(E)MKK6(E)ControlHSP27PRAK本文档共56页；当前第9页；编辑于星期日\22点16分ControlAniso.ArseniteTNF-80kDa-47kDa-39kDa-80kDa-47kDakDa97.4-68.0-43.9-29.0-18.4-14.3-ControlAniso.ArseniteTNFABThemajorkinasesofp38?andp38本文档共56页；当前第10页；编辑于星期日\22点16分P38MAPKinasePathway本文档共56页；当前第11页；编辑于星期日\22点16分蛋白磷酸化位点分析及其功能鉴定本文档共56页；当前第12页；编辑于星期日\22点16分PhosphopeptidemapofHSP27phosphorylatedbyPRAKinvitroChromatographyElectrophoresispH1.9+MAPKAPK2ChromatographyElectrophoresispH1.9+PRAKChromatographyElectrophoresispH1