免疫胶体金的技术.pptx

免疫胶体金技术;一.概述;下金颗粒可见性的方法

u1983年 Moeremans等 在蛋白质转移电泳中应用了免疫金银染色法

u1986年 Fritz等 在免疫金银法基础上成功进行了彩色免疫金银染色;免疫胶体金技术;（二）胶体金的基本概念

胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。

---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm之间。;二.胶体金的制备;化学还原法;（二）影响溶胶稳定性的因素u电解质

u胶体金浓度u温度

u大分子物质;（三）胶体金的鉴定

【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小及金颗粒的均匀程度

【鉴定方法】将胶体金滴在覆有Formvar

膜或碳-Formvar膜的镍网上，空气干燥，透射电镜下观察，拍照，测量金颗粒的直径，并计算100个以上胶体金颗粒直径的平均值及标准差;（四）制备胶体金的注意事项;三.胶体金探针的制备;（二）胶体金的预处理;(三)待标记蛋白质的处理

透析除盐:将蛋白质溶液装入透析袋中, 放在蒸馏水中透析, 4℃过夜

离心: 10000r/min,4℃, 1h, 去除蛋白质合物等沉淀;(四)胶体金蛋白质最佳结合率测定

不同直径的金颗粒, 及不同分子量大小的蛋白质, 其结合的比例是不同的

常用的检测二者结合量的方法有目测法和光电比色法;1.目测法;1;2.光电比色法;(五）标记;常用几种蛋白质标记时胶体金的PH;磁力搅拌下，逐滴加入蛋白质溶液，作用5～15min

继续磁力搅拌，加入5％牛血清白蛋白，使其终浓度为1％，搅拌10min；也可加3％聚乙二醇，使其终浓度为0.05％;（六）标记探针的纯化;1.超速离心法;2. 凝胶过滤法;(七) 标记探针的鉴定;四.免疫胶体金染色方法;(一)免疫金染色法;【特点】

阳性部位显红色

染色程序简便, 不需显色或显影过程

但一般要求金颗粒的直径20nm, 并要求用高浓度的免疫金溶液;(二)免疫金银染色法;1.光镜免疫金银法

3在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤

3显影液的配制及显影过程应在暗处进行

3阳性部位呈黑色颗粒状

32. 电镜免疫金银法

3 包埋前染色, 包埋后染色;【IGSS法优点】;(三)彩色免疫金银染色法;五. 免疫胶体金技术的特点