药物分离纯化技术制备色谱分离技术详解演示文稿.pptVIP

离子交换树脂的一般原则----选择取决于被分离物质的电荷性质；强的使用范围宽，弱的分离生物大分子时，活性不容易失去；反离子，为了提高交换容量，选择结合力小的反离子；亲疏水性选择，一般分离大分子时，选择疏水性的基质，活性易保持；制备色谱技术*本文档共48页；当前第30页；编辑于星期一\2点17分常规柱色谱的操作(1)装柱：干法和湿法；(2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽可能窄；(3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表面，可梯度洗脱；(4)流分收集：常采用固定体积收集法，结合TLC检验；(5)样品回收：减压蒸馏或重结晶制备色谱技术*本文档共48页；当前第31页；编辑于星期一\2点17分干柱柱色谱干吸附剂，待分离样品配成浓溶液或吸附于少量填料上上样，洗脱液接近色谱柱底部时停止洗脱，挖出或切开色带。制备色谱技术时间短节省试剂玻璃柱尼龙柱*本文档共48页；当前第32页；编辑于星期一\2点17分减压柱色谱减压促进溶剂流动。制备色谱技术*本文档共48页；当前第33页；编辑于星期一\2点17分与加压相比，变换溶剂更加方便；吸附剂高度一般不超过5cm；分离过程中，逐渐增加洗脱剂中高极性溶剂的比例，开始阶段增加幅度较小(1%,2%,3%)，随后幅度逐步增大(5%,10%,20%等)，通常收集20-25个流分即可将所有成分洗脱。制备色谱技术*本文档共48页；当前第34页；编辑于星期一\2点17分药物分离纯化技术制备色谱分离技术详解演示文稿*本文档共48页；当前第1页；编辑于星期一\2点17分（优选）药物分离纯化技术制备色谱分离技术*本文档共48页；当前第2页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术常规制备薄层色谱PTLC薄层板制备为了增大上样量，增加了吸附剂用量。固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶支撑：玻璃板或铝箔平均25?m,5~40?m硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P*本文档共48页；当前第3页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术硅胶粒径范围影响：越细越均匀，分离度越高，但？粒径范围宽，分离效率低，怎么办？------薄层厚度的渐变薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。*本文档共48页；当前第4页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术薄层板的制作方法：常采用湿法：平铺法和涂铺法。混合平铺涂铺器自然干燥一夜105-120℃活化黏合剂硅胶煅石膏或羧甲基纤维素钠水溶液*本文档共48页；当前第5页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术薄层色谱条件选择操作参数流速展开模式分离距离样品量流动相选择性溶剂强度黏度展开缸类型薄层板和展开缸空腔体积比值温度蒸气相固定相薄层厚度颗粒大小质量开放型操作不连续*本文档共48页；当前第6页；编辑于星期一\2点17分常用溶剂(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等；(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。制备色谱技术*本文档共48页；当前第7页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术上样和展开先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%；带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？*本文档共48页；当前第8页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术样品检测有色物质直接观察斑点；荧光物质在紫外灯下观察；无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显示暗斑；喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆；*本文档共48页；当前第9页；编辑于星期一\2点17分制备色谱技术常用显色剂：硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤5分钟，不同有机物显不同的颜色；0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色；酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层；5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。*本文档共48页；当前第10页；