第四章 色谱的定性与定量7.pptx

第四章 色谱的定性和定量方法;一、色谱的定性分析;（1）气相色谱中用保留值定性的方法;已知物增加峰高法定性原理：在得到未知样品的色谱图后，往未知样品中加入一定量的已知物质，在同样色谱条件下的两色谱图对比图谱比较峰高。;②利用相对保留值定性;③利用保留指数定性

表示物质在固定液上的保留行为，是目前使用最广泛并被国际上所公认的定性参数，它具有定性可靠，重现性好，标准统一等优点。

可将储存在计算机中的标准保留指数转换成用户色谱条件下的保留指数和保留时间（tR）;（A）定义;（2）液相色谱中用保留值定性的方法;利用文献的数据进行对比和定性分析

注意HPLC的柱填充技术的复杂性，定性受到限制;最简单的方法：标准添加法

前提：要有标准物判断的标准：加入标准样后，使未知

样色谱峰增高，改变色谱条件，未知峰仍能增高;同时用其他方法

–其他色谱方法（改变机理，如：用不同的色谱柱

–其他检测器

PDA，光谱图比较、谱库检索 确认色谱峰的纯度

-保证每个色谱峰下只有一个被测的组份

-检查是否有共流出的物质（杂质）干扰色谱峰纯度确认的方法

-用光电二极管矩阵检测器比较光谱图

-峰纯度鉴定，四波长比例

MS，质谱图解析、谱库检索

–其他仪器方法;（3）平面色谱中用保留值定性的方法;2.联机定性;二、色谱定量分析;（一）定量分析基础;即：

式中： –组分i的质量

—组分i的浓度

—组分的校正因子（与检测器的性质和被测组分的性质有关）

—组分i的峰面积，

—组分i的峰高;2.峰面积的准确测定;第二法：三角形法;2)不对称峰峰高和峰面积的测量

第一法：峰高×峰宽的平均值;第二法：峰分割计算后加和法A=A1+A2

=h1×b1+h2×b2

第三法：大峰上的小峰峰面积的测量

第四法：基线漂移时色谱峰峰面积的测量第五法：重叠峰峰面积的测量;3.定量校正因子的测定

（1）绝对校正因子（fi)

★ fi的物理意义:单位峰面积所代表的I组分的量,是一个与i组分的物理化学性质和检测器的性质有关的常数

★定量校正 因子的计算公式为：;绝对校正因子fi的大小主要由操作条件和仪器的灵敏度所决定，既不容易准确测量，也无统一??准；当操作条件波动时，fi也发生变化。故fi无法直接应用，定量分析时，一般采用相对校正因子。;（2）相对校正因子（校正因子）：;根据物质量的不同表示方法，校正因子分为：

①质量校正因子(fm)

定义：当物质量用质量来表示时的校正因子称为质量校正因子(fm),表示单位峰面积所代表的组分质量，质量一般用g或mg表示.;②摩尔校正因子(fM)

定义：物质的量用摩尔数表示，表示单位峰面积所代表的组分摩尔数;③体积校正因子（fv）

定义：物质的量用体积表示,表示单位峰面积所代表的组分体积。;(3)相对响应值sˊ

相对响应值是物质i与标准物质S的响应值（灵

敏度）之比。单位相同时，与校正因子互为倒数，即：

与只与试样、标准物质以及检测器类型有关，而与操作条件和柱温、载气流速、固定液性质等无关，是一个能通用的常数。;（4）校正因子的实验测量方法

★样品的准备：测定校正因子时，要精密称定适量色谱纯的被测组分和基准物质，配制成已知准确浓度的样品。

★样品的测定：在已确定的色谱条件下，取准确体积的样品进样，从谱图上获得准确的峰面积

★计算：根据相对校正因子的计算公式可以算出质量（或摩尔或体积）校正因子;例： 某试样合有5μg乙醇，测得相应的色谱峰面积为150mm2，求乙醇的fi。;例： 准确称取一定质量的色谱纯对二甲苯、甲苯、苯及仲丁醇，混合后稀释，采用氢焰检测器，定量进样并测量各物质所对应的峰面积，数据如下：;（二）定量方法;★优点：归一化法很直观，容易接受，计算简便、准确，当操作条件如进样量、流速等发生变化时，对计算结果的影响很小，是一种常用的计算方法

★缺点：校正因子的测定比较麻烦，必需所有组分都出峰

★注意：

▼主要用于GC的定量测定，当 fi相近时，可直接用峰面积归一化法。

▼由于检测技术的影响,HPLC中很少使用归一化;2、内标法;键：选择合适的内标物内标物的选择原则：

A、内标物必须是原样品中不存在的物质，其性质尽量与待测组分相近(同系物、异构体)

B、内标物不能和被测组分起化学反应，要能完全溶于被测样品中；

C、内标物的峰尽可能接近待测组分的峰，或位于几个待测组分的中间，但必须和样品中的所有峰完全分离；

D、内标物的加入量应和待测组分相近。;待测组分(i)的量mi为：

设样品的总量为m，则待测组分i的质量分数为;内标法的特点：

★ 无归一化法的限制，即只要被测组分能出峰，不和其他峰重叠，不管其他组分是否出峰或是否重叠，都可以用内标法进行定量分析

★定量准确，受操作条件影响较小

★ 可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失

★ 若加入几种内标