薄层色谱和层析.pptxVIP

薄层色谱(TLC);将溶剂抽提中的一个相固定在硅胶上，装在柱内，并按色谱法操作，使另一液相流过柱子，分离获得成功。从此出现了

基于分配原理的分配色谱法，因此获得了诺贝尔奖。以后的发展采用了纤维素、继而采用滤纸作分配色谱载体，发展了纸色谱法。薄层色谱法的研究和发展也出现在二十世纪的三、四十年代，现在已和气、液色谱一起成为最常用的色谱分离、分析方法。为与柱色谱相区别，并突出纸色谱和薄层色谱的特点，这两种方法也叫平床色谱法（Flatbedchromatography）或面色谱法（Planarchromatography）。

色谱法经过多年的发展已有多种操作形式，其分类方法也有多种。按固定相和流动相的物态可分为以气体为流动相的气相色谱（包括气固色谱、气液色谱）和以液体为流动相的液相色谱（包括液固色谱、液-液色谱）；如以固定相的操作方

式以及形状分类则有柱色谱、纸色谱、薄层色谱；;2-薄层色谱中，组分的移动情况常用比移值Rf来表示：

Rf=原点至组分点中心的距离/原点至流动相前沿的距离也有用“高比移值”表示：

hRf=Rf×100

和“相对比移值”表示，即相对于某一物质X的Rf值，用Rx表示：

Rx=Rf/Rx

（原点至组分点中心距离与原点至物质X点中心的距离的比值Rf总小于1；Rx可小于1，也可大于1；hRf可在1～100之间;薄层色谱中，Rf值与组分的分配系数K值有关：K=Cs/CM

=溶质在固定相中浓度/溶质在流动相中浓度若该组分的移动距离为d1，流动相移动距离为dm ,

d2=dm－d1

Rf=d1/dm=d1/(d1+d2)

如果组分的分配系数大，则在水中分配量大，移动距离小，Rf小。因此，K与d1、d2有如下关系：

K∝d2/d1

此外，移动距离也与二相之体积比有关，体积大者，在其中分配的量也多。如以Vs表示固定相的体积，Vm表示流动相的体积

Vs/Vm∝d2/d1;合并上两式：

d2/d1=KVs/VmRf=d1/(d1+d2)=d1/(d1+d1KVs/Vm)

=Vm/(Vm+KVs)

或 K=Vm/Vs(1/Rf－1)

若实验条件固定，则两相体积比也固定不变，则决定Rf的主要因素是分配系数K。由K值可推倒出Rf值。但有时纸纤维对某些物质也有作用，从而使实测Rf值与计算（推倒）Rf值有一定差别。

在分配色谱中，但固定液的极性大于流动相的极性时，称为正相分配；当固定液的极性小于流动相的极性时称为反相分配。通常纸色谱均为正相，即有机溶剂为流动相，吸收在滤纸上的水分作固定相。但有时也有将滤纸用极性较小的液体（如烃类）处理后作固定相，而以极性较大的含水溶剂作流动相，则为反相色谱。用DMF处理的仍然为正相。;薄层色谱与HPLC的对比;4-吸附剂与载体

（1）对吸附剂的要求

（Ⅰ）具有大的表面积与足够的吸附能力

（Ⅱ）对不同组分有不同吸附性能，这样有好的分离效果

（Ⅲ）在所用溶剂和展开剂中不溶解

（Ⅳ）不与试样中各组分、溶剂和展开剂起化学反应、破坏或分解作用;（Ⅴ）粒度均匀，使用过程中不破坏

（Ⅵ）具有可逆的吸附性，既能吸附样品组分，又易于解析

（Ⅶ）为便于观察分离结果，吸附剂最好为白色。

常用的吸附剂有硅胶s氧化铝s聚酰胺s硅酸镁s而CaOsMgOsCa(OH)2sMg(OH)2sCaSO4sCa3(PO4)2sMg3(PO4)2s

淀粉s蔗糖等，或因碱性太大，或吸附性太弱，用途有限，活性炭因吸附性太强和黑色，使应用受到限制。

（2）分配色谱对载体的要求

表面积大

在展开剂中不溶，与展开剂和样品组分不起化学反应或解作用

对样品组分无吸附性或吸附性弱

对固定液是惰性的;常用的有纤维素和硅藻土。

实际工作中，吸附剂、载体等的选择，首先决定于样品成分的性质，即它们的溶解度、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等，还有价格、是否容易得到等。

样品的溶解度

任何类型的化合物都可首先考虑使用硅胶和氧化铝薄层，如果水溶性的化合物在吸附薄层上分离不好，可试用纤维素或硅藻土分配薄层，如果正相不行可选用反相。

样品的酸碱性

硅胶略带酸性，适用于酸性和中性物质分离；碱性物质与硅胶有相互作用，展开时易吸附于原点不动或拖尾。

氧化铝呈碱性，适用于碱性和中性物质的分离。

硅胶和氧化铝1：1量掺和使用，得中性吸附剂，或在制板时加入稀酸或稀碱使其变性，或用酸性或碱性展开剂展开，以改变硅胶或氧化铝原来的性质。;（Ⅲ）样品的极性

物质的极性愈大，氧化铝和硅胶吸附愈牢，物质极性大小如下：

饱和烃不饱和烃醚酯醛酮胺羟基化合物酸和碱

吸附太牢也不易分离，如果硅胶、氧化铝吸附性太强，可掺入不同比例的硅藻土，或其它低吸附性物质。

（3）常用吸附剂

硅胶：105～11