血液系统疾病动物模型制备详解演示文稿.pptVIP

模型评估和应用本模型形成的血栓为红色血栓方法简便主要用于溶栓药物溶栓作用的观察。本文档共79页；当前第28页；编辑于星期一\3点18分二.DIC的动物模型本文档共79页；当前第29页；编辑于星期一\3点18分本文档共79页；当前第30页；编辑于星期一\3点18分弥散性血管内凝血(DIC)是一种由不同原因引起的以全身性血管内凝血系统激活为特征的获得性综合征，表现为先发生广泛性微血栓形成，继而因大量凝血因子和血小板被消耗（有时伴有纤溶亢进），导致多部位出血、休克、器官功能障碍及微血管病性溶血性贫血。本文档共79页；当前第31页；编辑于星期一\3点18分实验对象：成年家兔，雌雄随机1.家兔DIC模型的复制本文档共79页；当前第32页；编辑于星期一\3点18分造模原理正常体内循环血液中不含组织因子，当组织损伤或内皮细胞和白细胞激活时，组织因子能释放或暴露于循环血液启动外源性凝血过程。兔脑粉含有组织因子，静脉注射兔脑粉后通过激活外源性凝血途径引起DIC.本文档共79页；当前第33页；编辑于星期一\3点18分兔脑粉浸液的制备：健康成年家兔安乐处死后,即刻开颅摘取兔脑，除去血管、脑膜和其它结缔组织，用PBS洗净后，置于研钵中伴丙酮研磨成粥状悬液，静置数分钟后弃上清液，再加入丙酮研磨重复前述步骤多次，直至脑组织完全脱水成白色粉末，置4oC保存待用。造模方法：本文档共79页；当前第34页；编辑于星期一\3点18分称重后，用20%乌拉坦4ml/kg耳缘静脉注射麻醉动物用生理盐水配制4％兔脑粉溶液，按2ml／kg体重计算兔脑粉溶液，加生理盐水稀释至20m1后，由耳缘静脉缓慢注入（10min）。分别于注入兔脑粉溶液前15min、注入后15min和45min，记录家兔的血压和呼吸，并取血置于有肝素的注射器中，以测定3P试验、PT、纤维蛋白原、血小板计数。造模方法复制DIC模型：本文档共79页；当前第35页；编辑于星期一\3点18分凝血酶原时间(PT)测定①P试液配制：取兔脑粉0.2g，加入5mlNS充分混匀，置C37oC恒温水浴箱内孵育1hr，孵育期间用玻璃棒搅拌3至4次，孵育后混匀、离心(1000rpmx5min）,取上清液与等量氯化钙（0.025mol／L）溶液混匀。取被检血浆0.1ml，置于小试管内放于37℃水浴中。②取待测血浆0.1ml加入P试液0.2ml，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间.③重复3次，取平均值,家兔正常值为6～8sec。造模方法检查急性DIC的几种血液学常规方法：本文档共79页；当前第36页；编辑于星期一\3点18分血小板计数吸取20μl全血加入到0.38ml血小板稀释液中混匀，用滴管将上述混悬液一小滴滴入血球计数板内，静置15min后，用高倍镜计数。数5个方格内之血小板数，乘以1000，即得每立方毫米血小板数。造模方法本文档共79页；当前第37页；编辑于星期一\3点18分鱼精蛋白副凝实验(3P实验)①取全血置于EP管中，离心（5000rpmx3min）后，取上清液即血浆。②取血浆0.4ml置于试管中，加入0.1ml1%硫酸鱼精蛋白液混匀。③室温下静置30min后摇动试管，出现白色纤维或凝块者为阳性，均匀浑浊而没有出现白色纤维者为阴性。造模方法本文档共79页；当前第38页；编辑于星期一\3点18分血清纤维蛋白(原)含量测定(饱和盐水法)①取血浆0.5m1置于12X100mm的试管中，加入饱和氯化钠溶液4.5m1，充分混匀，置于37℃水浴中孵育3min，取血后再次混匀，用721型分光光度计比色，测定光密度.②以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作作为对照。③对照管调零点，测出光密度(波长520mm)后，按下式计算纤维蛋白原含量：测定管光密度×1000=mg%0.5造模方法本文档共79页；当前第39页；编辑于星期一\3点18分动物死后观察各脏器的变化造模方法尸检本文档共79页；当前第40页；编辑于星期一\3点18分2.小鼠DIC模型的复制本文档共79页；当前第41页；编辑于星期一\3点18分Shwartzmanreaction:ageneralizedreactionfollowingtwointravenousinjectionsofendo