兽用疫苗生产与检验技术.pptx

关于兽用疫苗生产与检验技术;兽用生物制品系指用天然或人工改造的微生物（细菌、病毒、衣原体、钩端螺旋体等）及其代谢产物、寄生虫、动物血液或组织等为原材料，采用生物学、分子生物学或生物化学等相应技术制成的生物制剂，用于预防、治疗或诊断畜禽疫病。

1、按照性质和制造方法 疫（菌）苗、类毒素、抗血清、诊断制剂和微生态制剂等。;将细菌、病毒、寄生虫等接种于特殊基质进行培养，收获其抗原单位或亚单位，或用人工合成的抗原单位或亚单位制备而成的活的或灭活的、具有特异性和免疫原性的生物制品，用于预防靶动物的疾病。

预防用兽用生物制品包括：灭活疫苗、活疫苗、重组亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因缺失疫苗、重组活载体疫苗和核酸（DNA）疫苗。;强毒(菌)或弱毒（菌）→培养→灭活或加热→纯化或浓缩→佐剂或防腐剂。

灭活的毒素或提取的亚单位或rDNA产生亚单位。

灭活疫苗稳定、安全，便于运输和保存，易于提纯纯化和制备多价、多联苗。但用量较大、接种次数多、免疫力产生慢、注射困难、注射局部可能有反应等。;）致弱的弱毒（菌、虫）株 动物、组织、细胞、鸡胚或培养基→培养→降低毒力、保留免疫原性→筛选。

）自然弱（无）毒（菌、虫）株。

）异种毒（菌、虫）株。

）基因工程改造弱毒株。

活疫苗对原宿主动物无致病性或引起亚临床感染，能产生主动免疫力，用量少、成本低、免

疫力产生快、免疫期长。但可能存在不安全风险。;1）微生物→物理和化学方法→提取有效抗原成分。

2）病原→基因工程技术→保护性抗原基因序列插入合适的表达质粒→高效稳定表达→生产抗原→亚单位疫苗。;用化学方法人工合成多肽作为抗原。纯度高、稳定，但只能线性表达，不能折叠，免疫原性较差。;病原体→基因工程方法→缺失致病性基因或非必要糖蛋白→保持免疫原性→降低致病性。疫苗毒力不易恢复，稳定性好，可配合鉴别诊断方法，区别免疫动物和自然感染动物。;病原保护性抗原基因序列→插入另一种无毒或弱毒的微生物基因组→表达→构建重组活载体疫苗株。可以同时表达多种抗原，制成多价或多联疫苗，毒力不返强。;病原保护性抗原基因→连接细菌或病毒DNA →直接导入动物体→表达抗原

→诱导产生免疫保护。制造简便、成本

低、安全、免疫期长、热稳定性好，但仍未商品化生产。;1、常规免疫—血清学诊断技术

（1）凝集试验抗原：

直接凝集试验（平板法、试管法）：抗原和抗体混合后直接发生凝集反应。

间接凝集试验（间接血凝、胶乳凝集和反相间接血凝试验）。;（2）免疫沉淀试验抗原：包括试管沉淀法、单相免疫扩散试验和双相免疫扩散试验、免疫电泳、对流免疫电泳等。

（3）中和试验：将特异性血清与相应病原混合，用血清—病毒混合物接种靶动物、鸡胚或细胞培养，观察感染情况进行疾病诊

断。

（4）补体结合试验抗原：抗原抗体复合物可以激活补体，出现各种生物学反应。;（5）酶联免疫吸附试验（ELISA）：包括直接法、间接法、双抗体夹心、竞争ELISA等。

（6）荧光抗体染色技术：直接法、间接法、竞争法等。

（7）胶体金免疫检测技术。

（8）免疫组化诊断试剂。;（1）生物技术：单克隆抗体技术（荧光抗体染色技术或酶联免疫染色技术）。

（2）分子生物学技术。PCR（RT－PCR）扩增技术。荧光定量PCR（RT－PCR）。

基于核酸序列扩增技术（NASBA）。

核酸探针。;1、抗血清：用抗原多次免疫动物，提取血清制成，用于治疗或预防动物疾病。

2、微生态制剂：含活菌的制剂，具有调节机体菌群、增强免疫力、促生长等。

3、卵黄抗体：用抗原多次免疫禽类，提取卵黄抗体制成，用于治疗或预防动物疾病。

4、干扰素：用病毒等诱导产生干扰素。

5、转移因子：用动物脏器或组织提取制成，作为非特异性免疫调节剂，增强机体免疫力，提高生产性能。;（一）兽用灭活疫苗的制备技术

灭活疫苗是用菌（毒）种培养物或含毒组织或细胞培养物，经化学灭活剂灭活或加热处理，使微生物失去活性而保持免疫原性，再加入适当的防腐剂或加入免疫佐剂制成。;1.1、菌（毒）种标准

历史清楚；

生物学性状明显；

遗传稳定；

优良的免疫原性与反应原性；毒力在规定的范围内。;原种细菌原种应规定其培养特性、生化特性、血清学特性、毒力和免疫原性等，并作纯粹检查。病毒原种应规定其生物学特性、理化特性、血清学特性、最小感染量、最小免疫量、安全性等，并纯粹。

基础种子基础种子由原种制备而来，基础种子为企业生产兽用生物制品提供种子来源，应作系统鉴定，并规定代次。;菌种的选育 分离病原→纯粹检验→致病性鉴定和抗原性测定→设计制成灭活疫苗→接种实验室动物→攻毒→用本动物进行保护率测定→以确定疫苗候选株。

毒种的选育 弱毒毒种有天然弱毒株或人工致弱毒株；强毒毒株分离→系统鉴定（无污染、毒力强而稳定、免疫原性好、抗原谱广、与流行毒血清型相符）→疫苗候选株。;