结核病的实验室诊断技术及应用演示.pptVIP

GeneXpert应用1、TB复合群鉴定。2、利福平耐药检测。3、WHO推荐4、Xpert?MTB/RIF检测试剂的阳性检出率低于人们对分子生物学诊断试剂高敏感度的预期值，（1000CFU/ml）本文档共54页；当前第30页；编辑于星期六\14点43分DNA用于临床检验的不足“死菌检测呈阳性”，与临床相关性差不能区分“潜伏感染”“活动性感染”易交叉污染反应易受抑制本文档共54页；当前第31页；编辑于星期六\14点43分NASBA（国外）TMA（国外）SAT（国内）四、常见的RNA检测技术本文档共54页；当前第32页；编辑于星期六\14点43分SAT技术是将核酸恒温扩增和实时荧光检测相结合的一种新型RNA检测技术。TB—SAT检测技术本文档共54页；当前第33页；编辑于星期六\14点43分TB-RNA释放恒温扩增实时检测超声波（300W）15min痰液预处理42℃40min与反应液混合60℃10min42℃5minTB-SAT操作流程50μl稀释液全程2小时，会做PCR，就学的会SAT本文档共54页；当前第34页；编辑于星期六\14点43分TB-SAT检测技术优点本文档共54页；当前第35页；编辑于星期六\14点43分RNA诊断技术的优势灵敏度高：RNA≥DNA拷贝数与临床相关性好：区分“死活菌”：减少抗生素滥用可以诊断“活动性感染”：活动性感染：RNA转录活跃潜伏感染：RNA不转录不易污染：靶标和扩增产物都是RNA本文档共54页；当前第36页；编辑于星期六\14点43分TB-SAT检测区分MTB和NTM结核分枝杆菌复合群（MTB）：人型结核分枝杆菌牛型结核分枝杆菌非洲型结核分枝杆菌非结核分枝杆菌（NTM）：研究表明，TB-SAT可以区分如下NTM：堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、海分枝杆菌等18种NovelReal-TimeSimultaneousAmplificationandTestingMethodToAccuratelyandRapidlyDetectMycobacteriumtuberculosisComplexJ.Clin.Microbiol.2012,50(3):646.DOL:10.1128/JCM.05853-11.本文档共54页；当前第37页；编辑于星期六\14点43分活菌检测技术，可用作肺结核治疗效果评估据文献报道：每个结核分枝杆菌含有约2000个拷贝rRNA研究表明：rRNA与结核分枝杆菌的生活力有着很好的相关性，rRNA可以反映结核分枝杆菌的死菌活菌状态研究表明：在用药治疗期内，随着结核分枝杆菌的死亡，rRNA大约在7天左右时间全部降解。而DNA含量几乎保持不变VIVIANJONAS,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Sept.1993,p.2410-2416CLAUDIOPIERSIMONI,etal.JOURNALOFCLINICALMICROBIOLOGY,Jan.1997,p.193–196.GABRIELLEM.E.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965本文档共54页；当前第38页；编辑于星期六\14点43分免疫法常有既往感染问题SAT更有利于治愈判断窗口期时间示意相对浓度示意抗体RNADNA病原体感染前后各检测靶标的含量变化死菌的RNA快速降解，有助治愈判断用药治疗DNA需要一段时间降解RNA快速降解本文档共54页；当前第39页；编辑于星期六\14点43分相比DNA,RNA检测能更好的体现疗效服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度变化，相比DNA,RNA与药物浓度变化的符合率更高，RNA检测能更好的进行疗效评估。GABRIELLEM.E.AssessmentofMycobacterialViabilitybyRNAAmplification.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.1994,p.1959-1965DNARNA本文档共54页；当前第40页；编辑于星期六\14点43分SAT与培养的监测结果一致，可应用于疗效评估监测项目