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南宁市红十字会医院检验科HIV筛查实验室HIV筛查实验室样品采集和处理程序文件编号:第PAGE
南宁市红十字会医院检验科
HIV筛查实验室
HIV筛查实验室样品采集和处理程序
文件编号:
第PAGE1页
共3页
2011年10月版第0次修订
实施日期:2011年10月18日
范围
本文件规定了用于人免疫缺陷病毒(HIV)检测的全血、血清、血浆、细胞样品的采集和处理方法,适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、耐药检测,CD4+和CD8+T淋巴细胞测定和HIV分离培养。
样品种类及相应的用途
全血、血清、血浆样品可用于HIV抗体检测。
抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。
血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。
全血、血浆样品可用于HIV核酸的定性检测。
全血可用于HIV-1分离培养。
操作步骤
采样前准备
根据检测项目的具体要求,确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法,按照临床采血技术规范的要求操作,遵守生物安全要求。
要检查所需物品是否已备齐,是否在有效期内,有无破损,是否足量,特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致,并注明样品采集时间。选择合适的室内(外)采血空间,受检者坐(卧)于合适的位置,准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。
采血前,先对装有样品的离心管或滤纸进行标记,标记的内容至少应包括:患者姓名、送检科室、床号
样本采集和处理
抗凝全血:消毒局部皮肤,用加有抗凝剂(EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠)的真空采血管抽取适量静脉血,或用一次性注射器抽取静脉血,转移至加有抗凝剂的试管中,轻轻颠倒混匀6~8次,备用。
末梢全血:消毒局部皮肤(成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指。1岁以下儿童
采用足跟部)。用采血针刺破皮肤,用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液,备用。
血浆:将采集的抗凝全血1500~3000r/min离心15min,上层即为血浆,吸出置于合适的容器中,备用。
血清:根据需要,用一次性注射器(或真空采血管)抽取5~10ml静脉血,室温下自然放
置1~2h,待血液凝固、血块收缩后再用1500~3000r/min离心15min,吸出血清,置于合适的容器中,备用。
根据检测要求选用适当的抗凝剂,如CD4+和CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA钠盐或钾盐、
枸橼酸钠、肝素钠,HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用EDTA钠盐或钾盐或枸橼酸钠。
采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里,妥善处理,防止发生职业暴露。
样品采集后处理、保存、运输的时限和条件,因不同的检测项目而异,应参见不同检测项目要求。
采样之后,应及时在登记本上作记录,记录的内容至少包括:
患者姓名、性别、年龄、送检科室、床号、送检项目、标本类别、采集时间、采集者
样品的保存
用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品,短期(1周)内进行检测的可存放于2~8℃,一周以上应存放于-20℃以下。
用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可存放于4℃,3个月以内应存放于
-20℃以下。3个月以上应置于-70℃以下。
艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室,筛查阴性样品,可根据具体需要决定保存时间,一般实验室保存期为7天。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
样品的运送
应符合生物安全要求;要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。
应采用三层容器对样品进行包装,随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息,并应放置在第二层和第三层容器之间。
第一层容器:直接装样品,应防渗漏。样品应置于带盖的试管内,试管上应有明显的标记,标
明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料,以免碰碎。
第二层容器:容纳并保护第一层容器,可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。
第三层容器:容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签,注明数量、收样和发件人及联系方式,同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压”等字样,还应易于消毒。
用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下(18~25℃)或4℃(特殊要求时)运送。用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输。DBS样品应在室温下(18~25℃)运送。每一件包装的体积以不超过50mL为宜。
运送样品必须有记录。
样品的接收
样品接收必须在具有处理感染性材料能力的实
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