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5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响;5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响;【关键词】食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡

ABSTRACT：ObjectiveToexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine

(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllinandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).MethoEca9706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT，flowcytometry，immunohistochemistryandRT-PCRwereusedtodetermine

thecellgrowth，apoptosis，andtheexpressionofTFPI-2geneandits

protein.Results Eca9706celllinehadhypermethylationofTFPI-2.Afterdemethylationby5-Aza-CdRtreatment，theproliferationofEca9706wasinhibited，theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration-dependentmanner.RT-PCRdetectedthatmRNAexpression

ofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P0.05).

Conclusion 5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell，increasetheapoptosisrate，reactivatetheTFPI-2genetranscriptionandproteinexpressionbydemethylation.

KEYWORDS：esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;

5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis;组织因子途径移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor，TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物，在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前，关于TFPI-2;1.4 流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化;1.6 免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达;2.2 干预前后细胞凋亡率的变化;TFPI-2蛋白的阳性表达率增加，对照组、1.6μmol/L组、25.6μmol/L组、;目前，有体外实验表明，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR通过去甲基化作用可使多种含有CpG岛的高甲基化抑癌基因重新表达，从而恢复抑癌功能[9]。本实验RT-PCR结果显示，TFPI-2在Eca9706细胞中无表达，经过不同浓度的5-Aza-CdR处理Eca9706细胞后，TFPI-2亦重新出现表达，且在一定范围内随药物诱导浓度的增大表达逐渐增强。MIZUNO等[10]研究表明，肿瘤细胞中DNMT的表达较正常的高4～12倍，也证实DNMT上调参与肿瘤发生。这与我们的实验结果一致。根据MTT

实验可知，经过5-Aza-CdR干预处理过的Eca9706细胞增殖明显受??制，

且随着药物浓度的增加，抑制作用越明显。从本实验结果分析，DNA启动子区去甲基化能较明显地抑制食管癌细胞增殖，并与其诱导剂量呈正相关，推测这种抑制作用与去甲基化后重新激活TFPI-2基因的转录和表达有着直接关系;此外可能与去甲基化后诱导细胞凋亡有关。进而通过流式细胞仪分析，结果显示，经不同浓度5-Aza-CdR干预的Eca9706的细胞中，用药组与对照组相比细胞凋亡率凋亡率有所增加，并且与5-Aza-CdR诱导剂量有依赖性关系。BENDER等[11]在同等条件下用5-Aza-

CdR处理恶性肿瘤细胞系和正常纤维细胞系时，发现肿瘤细