大肠菌群的检测.pptxVIP

会计学;大肠菌群的存在

早在19世纪末就有人用检查大肠杆菌的办法来确定水中有无伤寒沙门氏菌。水受到沙门氏菌的污染，有时水中该菌的数量很少，不易直接检查出来。若水中检出一定数量的大肠杆菌，则说明水已被粪便污染

正常粪便中的细菌种类很多，但符合理想指标菌条件和特性的细菌主要有3类群，即大肠杆菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌。在粪便中大肠杆菌数量最多，每克粪便中可达30亿个。;大肠杆菌容易引发的疾病：

肠道外感染;检样;革兰氏阴性无芽孢杆菌;测定大肠菌群检验常 器材

测定大肠菌群多用培养基和器材主要有单料乳糖胆盐，伊红美蓝琼脂（EMB），;一.检样稀释

取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成均匀稀释液。同一稀释度在菌落总数测定的同时接种于乳糖胆盐复发酵管。

1)以无菌操作取检样25mL（g），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。固体取样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~1000r＼min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。

2用以灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有3mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。;另取1mL灭菌试管，按上项操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释液1次即换用1支10mL吸管。

二.乳糖发酵试验

1）根据食品卫生标准要求或对检样污染程度的估计，选择3个稀释度，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵管。接种量在1mL以上者用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及以下者用单聊乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管。置（36+1.36-1）℃恒温箱内，培养（24+2.24-2）h，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性。; 经上述所说，如有产气者，将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂（EM琼脂）平板上划线分离，然后置（36+1 36-1）℃恒温箱内，培养18~24h后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。;证实试验;注意事项：

1：如果平板上典型菌落甚少或均不够典型，应多挑菌落做证实实验，以免出现假阳性。

2：在检验中应选用伊红美蓝平板为分离培养基在该平??上，大肠菌落大多呈紫黑色，有金属泽或无金属光泽。

3：挑取菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑取几个，以免出现假阴性。

4：对未产气的发酵管有疑问时，可以用收轻轻敲动或摇动试管，如有气泡沿管壁上浮，既应虑有气体产生。做进一步实验观察。;大肠菌群的存在

早在19世纪末就有人用检查大肠杆菌的办法来确定水中有无伤寒沙门氏菌。水受到沙门氏菌的污染，有时水中该菌的数量很少，不易直接检查出来。若水中检出一定数量的大肠杆菌，则说明水已被粪便污染

正常粪便中的细菌种类很多，但符合理想指标菌条件和特性的细菌主要有3类群，即大肠杆菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌。在粪便中大肠杆菌数量最多，每克粪便中可达30亿个。;证实试验