经典液相色谱法平面色谱分析.pptVIP

b.点样量和点样工具点样毛细管，微量注射器点样量一般以几微升为宜，毛细管大约1cm左右。点样斑点直径以2~4mm为宜。本文档共61页；当前第31页；编辑于星期六\14点31分c.点样方法吸取一定量的样液，轻轻接触于薄层的点样线上，点样线一般距薄层底边1.5~2cm，点间距约0.8~1.5cm(新药典规定为1.5~2.0cm)。点样后形成的原点面积越小越好，一般原点直径不超过2~4mm为宜。本文档共61页；当前第32页；编辑于星期六\14点31分展开和展开剂的流速展开先预饱和。展开前，将薄层板置于盛有展开剂的色谱缸内饱和15～30min,此时薄板不与展开剂直接接触，当色谱缸内展开剂蒸汽、薄层与缸内大气达到动态平衡时，即饱和时，再将薄层板浸入展开剂中，称预饱和。本文档共61页；当前第33页；编辑于星期六\14点31分边缘效应：指点在薄层板上的同一物质，薄板边缘的Rf值高于中部的Rf值的现象。本文档共61页；当前第34页；编辑于星期六\14点31分本文档共61页；当前第35页；编辑于星期六\14点31分展开剂的流速Uf本文档共61页；当前第36页；编辑于星期六\14点31分本文档共61页；当前第37页；编辑于星期六\14点31分实际情况比上面分析的要复杂的多。总之，薄层色谱过程中展开剂的流速是空间、时间的复杂函数。本文档共61页；当前第38页；编辑于星期六\14点31分显色显色方法：a.在日光下观察，划出有色物质的斑点位置。b.在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点，并记录颜色、位置、强弱。能发荧光的物质或少数有紫外吸收的物质可用此法检出。本文档共61页；当前第39页；编辑于星期六\14点31分c.荧光薄层板检测。d.显色剂显色。适用于无色，又无紫外吸收的物质。薄层色谱常用的通用型显色剂有碘、硫酸溶液、荧光黄溶液等。本文档共61页；当前第40页；编辑于星期六\14点31分18.5.3定性和定量分析定性分析依据：Rf值。用已知标准物质作对照，在多种展开系统中比较Rf值的大小。或与其它分析方法联用。本文档共61页；当前第41页；编辑于星期六\14点31分定量分析洗脱法用溶剂将斑点中的组分洗脱下来，再用适当的方法进行定量测定。斑点需预先定位。本文档共61页；当前第42页；编辑于星期六\14点31分直接定量法：目视比较法：将一系列已知浓度的对照品与试样溶液点在同一薄层板上，展开并显色后，…本文档共61页；当前第43页；编辑于星期六\14点31分薄层扫描法：用一定波长、一定强度的光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。精密度为±5%。双波长型薄层扫描仪测定方法：透射法和反射法。扫描方法：线形扫描和曲折形扫描本文档共61页；当前第44页；编辑于星期六\14点31分λ1λ2CHLPPMPM双波长薄层扫描光学线路示意图本文档共61页；当前第45页；编辑于星期六\14点31分18.5.4高效薄层色谱法(highperformancethinlayerchromatography；HPTLC)

高效薄层色谱的分离效率比经典薄层色谱提高三倍，每分钟可分离5个以上组分，最多可分离40种组分。检出灵敏度提高，分析时间缩短。高效薄层色谱法与经典薄层色谱法在吸附剂粒度等方面不同。本文档共61页；当前第46页；编辑于星期六\14点31分表：TLC与HPTLC的比较参数TLCHPTLC板尺寸(cm)20×2010×10颗粒直径(μm)10~405,10颗粒分布宽窄点样量(μl)1~50.1~0.2有效塔板数6005000展开距离(cm)10~153~6展开时间(min)30~2003~20最小检测量：吸收(ng)1~50.1~0.5荧光(pg)50~1005~10本文档共61页；当前第47页；编辑于星期六\14点31分18.6纸色谱法本文档共61页；当前第48页；编辑于星期六\14点31分经典液相色谱法平面色谱分析演示文稿本文档共61页；当前第1页；编辑于星期六\14点31分