细胞爬片HE染色方法.docx

细胞爬片 HE 染色 SOP 一 、 原 理 苏木素（Hematoxylin）－伊红（Eosin）染色法，简称 HE 染色法。 HE 染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别于细胞核和细胞质发生作用，使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折光率，从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像。该染色过程既有化学反应，又有物理作用参与。从化学反应看，组织细胞内含有酸性物质和碱性物质，细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合，使其中酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。HE 染色提供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色最常用的一种方法。 二、 实验用品 1、固定液：常用 95％乙醇和冰丙酮 2、苏木精染液：称取苏木精粉 0.5g，铵矾 24g 溶解于 70ml 蒸馏水中，然后取 NaIO 31g，水 5ml，再加入甘油 30ml 和冰醋酸 2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。 3、伊红染液：称取 0.5g 水溶性伊红染液，溶于 100ml 蒸馏水中。 4、稀盐酸乙醇溶液：用 75%乙醇配制 1％盐酸。 5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。 6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。三、 实验步骤 1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约 1×105/ml， 滴加于盖玻片上（置于 6 孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用 PBS 洗涤 3 次。 2、样品固定：95％乙醇固定 20min，PBS 洗涤 2 次，每次 1min。 3、染核：苏木素染液染色 2－3min，自来水洗涤。 4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。 5、染胞质：浸入伊红染液染色 1min，自来水洗涤。 6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。 若细胞用 4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色 12-15min， 伊红 5min 即可。