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免疫沉淀类实验演示文稿 本文档共32页；当前第1页；编辑于星期日\9点57分 （优选）第单元免疫沉淀类实验 本文档共32页；当前第2页；编辑于星期日\9点57分 在琼脂凝胶中，待检人血清IgG和羊抗人IgG抗血清在不同孔内各自向四周扩散，在比例恰当处形成肉眼可见的白色沉淀线，证明两者发生特异性结合反应。 实验原理 本文档共32页；当前第3页；编辑于星期日\9点57分 试剂 健康人血清，用生理盐水做1:5~1:40系列倍比稀释 、羊抗 人IgG抗血清、10~15g/L琼脂糖或琼脂粉 。 仪器 水浴箱、温箱 。 材料 载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸球、湿盒等 。 实验器材和材料 本文档共32页；当前第4页；编辑于星期日\9点57分 制备琼脂凝胶：用生理盐水配置10～15g/L琼脂，隔水加热煮沸备用。 浇板：将载玻片置于水平台上，用吸管吸取4~4.5ml融化的琼脂倾注于玻片上，滴加时注意速度不要过快，要使琼脂盖满整张玻片，使其均匀、饱满，勿溢出并避免产生气泡。 打孔 ：待琼脂凝固后，将梅花形打孔模板置于琼脂板下，用直径3mm的打孔器打孔，使其孔径为3mm，孔距为4mm，孔要求圆整光滑，孔缘不能破裂，底部勿与载玻片脱离。 加样：用10μl微量加样器分别取抗原、抗体加入孔中。中心孔加入抗体，周围孔分别加入不同稀释度的抗原。 温育：将加好样的琼脂凝胶板平放于湿盒中，37℃温箱温育24h，观察沉淀线。 实验方法 本文档共32页；当前第5页；编辑于星期日\9点57分 操作示意图 浇板 温育 打孔 加样 结果判断 中央孔—抗体成分 周围孔—不同稀释度的抗原成分（第1~5孔） 第6孔—阴性对照 1 2 3 4 5 6 本文档共32页；当前第6页；编辑于星期日\9点57分 以出现沉淀线的正常人血清最高稀释度为人血清IgG的扩散效价。 结果判断 本文档共32页；当前第7页；编辑于星期日\9点57分 北华大学 王雪松 该方法简便易行，结果稳定可靠。根据抗原抗体相遇后所出现沉淀线的特征，对其进行定性分析。若相邻两孔内抗原成分完全相同，则形成完全相连的两条沉淀线；若抗原完全不同，则形成交叉的两条沉淀线；若抗原部分相同，则形成部分相连的两条沉淀线；当抗原存在多种成分时，则呈现多条沉淀线以至交叉反应线，因此可根据沉淀线的位置、形状、数目等，初步分析抗原和抗体的纯度、浓度、扩散速度等理化性状。该方法除用于血清IgG的检测以外，还曾用于诊断和分析某些疾病，如检测AFP、HBsAg等，但敏感度低所需时间长。 实验讨论 本文档共32页；当前第8页；编辑于星期日\9点57分 实验二 单向免疫扩散试验 本文档共32页；当前第9页；编辑于星期日\9点57分 将一定量的羊抗人IgG抗血清成分混合于琼脂凝胶中，制成含有特异性羊抗人IgG抗血清的琼脂板，待凝固后打孔，并在相应孔中加入待检人血清IgG。使待检血清在琼脂板中向四周呈环状扩散，在两者浓度比例恰当处形成肉眼可见的白色沉淀环，沉淀环的直径或面积与待检人血清浓度呈正相关。同时用标准免疫球蛋白或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测人血清IgG浓度。 实验原理 本文档共32页；当前第10页；编辑于星期日\9点57分 实验器材和材料 试剂： 待检人血清、免疫球蛋白工作标准（IgG含量为10.10mg/ml）、羊抗人IgG抗血清（单扩效价1:100）、琼脂糖或琼脂粉、生理盐水、NaN3 。 仪器： 水浴箱、温箱 。 材料： 载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸球、三角烧瓶、湿盒半对数坐标纸等 。 本文档共32页；当前第11页；编辑于星期日\9点57分 实验方法 制备抗体琼脂凝胶:用生理盐水配置10～15g/L琼脂，加0.01%（0.1g/L）NaN3，隔水加热煮沸琼脂，置56℃水浴中备用。吸取99ml已融化的琼脂于三角烧瓶中，置56℃水浴中保温，将预温的羊抗人IgG抗血清1ml与琼脂充分混合，继续保温于56℃水浴中备用。 浇板:将清洁干燥的载玻片置于水平台上，用吸管吸取充分混匀的抗体琼脂4~4.5ml倾注于玻片上，置室温冷却凝固。要求浇板时要均匀、平整、无气泡、薄厚均匀。 打孔:待琼脂凝固后，用打孔器打孔，孔径3mm，孔距10~12mm。要求孔打得圆整光滑，孔缘不能破裂，底部勿与玻片分离。 本文档共32页；当前第12页；编辑于星期日\9点57分 加样:稀释人免疫球蛋白工作标准品：取冻干人免疫球蛋白工作标准品1支加蒸馏水0.5ml，待完全溶解后，用生理盐水稀释成不同的稀释度。其稀释范围为1:5、1:10、1:20、1:40，IgG相应含量为202