仪器分析课件高效液相色谱法详解.ppt

当吸附剂对溶质分子的吸附能力大于对溶剂分子的吸附能力时，溶质分子就吸附在吸附剂上，而将溶剂分子脱附；反之，溶质分子脱附。 显然，溶质分子的吸附能愈大，则保留值愈大；反之，保留值小或不被保留。 本文档共71页；当前第31页；编辑于星期日\9点32分 吸附剂吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和物理化学性质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。 组分与吸附剂性质近似时，易被吸附，呈现高的保留值；当组分分子结构与吸附剂表面活性中心的刚性几何结构相适应时，易于吸附。 从而使吸附色谱成为分离几何异构体的有效手段；不同的官能团具有不同的吸附能，因此，吸附色谱可按族分离化合物。吸附色谱对同系物没有选择性，不能用该法分离相对分子质量不同的同系物。 本文档共71页；当前第32页；编辑于星期日\9点32分 16-3-2 液固色谱固定相 固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的就是活性炭。 极性吸附剂又分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧酸和吡咯衍生物。 最常用的是硅胶，其次是氧化铝。很多薄层色谱和经典色谱是用硅胶进行分离的。现代液相色谱中硅胶不仅作为液固吸附色谱固定相，还可作为液液分配色谱的载体和键合相色谱填料的基体。表16-2。 本文档共71页；当前第33页；编辑于星期日\9点32分 16-3-3 液固色谱流动相 液相色谱的流动相必须符合下列条件： （1）能溶解试样，但不能与试样发生反应； （2）与固定相不互溶，也不发生不可逆反应； （3）黏度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性和柱效； （4）应与所用检测器相匹配，例如利用紫外检测器时，溶剂要不吸收紫外光； （5）容易精制、纯化，毒性小，不易着火，价格尽量便宜等。 本文档共71页；当前第34页；编辑于星期日\9点32分 选择流动相的基本原则是极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种不同极性的溶剂混合起来使用，如果试样组分的分配比值范围很广，则采用梯度洗脱。 本文档共71页；当前第35页；编辑于星期日\9点32分 16-3-4 应用 液固色谱最适宜分离那些溶解在非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。 特别适用于分离异构体。 本文档共71页；当前第36页；编辑于星期日\9点32分 16-4 液液色谱法 16-4-1 分离原理 液液色谱又称液液分配色谱，分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。分配系数小的组分，保留值小，先流出柱。 与气相色谱不同的是，流动相的种类对分配系数有较大的影响。 本文档共71页；当前第37页；编辑于星期日\9点32分 16-4-2 固定相 液液色谱的固定相由载体和固定液组成。常用的载体有下列几类。 （1）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体） 30～40 μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2 μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量底； （2）全多孔型载体 由硅胶、硅藻土等材料制成，直径为30-50 μm的多孔型颗粒 （3）全多孔型粒子载体 由nm级的硅胶粒子堆积而成，又称堆积硅珠，载体粒度为5-10 μm，由于颗粒小，所以柱效高，是目前使用最广泛的一种载体。 本文档共71页；当前第38页；编辑于星期日\9点32分 由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此，对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同的固定液即可解决分离问题。 例如，最常用的强极性固定液β，β′-氧二丙睛，中等极性的聚乙二醇，非极性的角鲨烷等。 本文档共71页；当前第39页；编辑于星期日\9点32分 为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固定液的机械涂渍，因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。 本文档共71页；当前第40页；编辑于星期日\9点32分 16-4-3 流动相 在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动