第五章色谱分离法新2.pptVIP

6.定性定量分析 2） 定量分析 目视比较半定量法：杂质的限量实验。 测量斑点面积：要求斑点边缘清晰 从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定：先确定斑点，再取下斑点和吸附剂，最后用适当的洗脱剂洗脱分析物，进行测定 薄层色谱扫描仪原位定量测定：紫外－可见吸收测定或荧光测定法。 本文档共96页；当前第63页；编辑于星期六\11点31分 7.常见问题及消除办法 1）斑点拖尾现象 ▲酸性物质用中性溶剂展开时，造成拖尾。（在展开剂中加入一定浓度的酸）。碱性物质类似。 ▲在碱性氧化铝薄层上分离酸性物质，或在硅胶G板上分离生物碱，由于成盐而造成拖尾。（禁止此类操作） ▲点样量过多造成拖尾（减少点样量） 本文档共96页；当前第64页；编辑于星期六\11点31分 7.常见问题及消除办法 3）边缘效应 板层中部斑点的Rf值小于两侧斑点的Rf值，这是因为沸点较低的和与吸附剂亲和力弱的溶剂在薄层的两个边缘处较易挥发（用刀片刮去同样宽度的边或增加板层的预饱和时间） 2）S形及波浪形斑点 主要由于吸附剂的颗粒细度和板层厚度不均匀造成（铺板时要注意这个问题） 本文档共96页；当前第65页；编辑于星期六\11点31分 7.常见问题及消除办法 5）Rf值不稳定 温度、分配系数、展开剂的挥发、板层厚度和不同批号的薄层板都影响Rf值。注意逐一分析。 4）展速慢 加入丙酮等中等极性溶剂可使不相混合的溶剂混合，加快展速。 本文档共96页；当前第66页；编辑于星期六\11点31分 四、应用 1. 氨基酸分离 薄层:硅胶G板; 流动相: 正丁醇:醋酸:水=3:1:1 Rf值:丙氨酸0.27, 氨基辛酸0.60, 精氨酸盐酸盐0.08, 磺基丙氨酸0.14, 胱氨酸盐酸盐0.16, 二羟基苯丙氨酸0.45, 甘氨酸0.22, 组氨酸盐酸盐0.06, 羟脯氨酸0.20, 亮氨酸0.47, 甲硫氨酸0.40, 颉氨酸0.36, 苯丙氨酸0.49, 脯氨酸0.19, 肌氨酸0.17, 苏氨酸0.25, 色氨酸0.56 本文档共96页；当前第67页；编辑于星期六\11点31分 2.核苷,核苷酸, 寡核苷酸的分离 薄层:硅胶F254 流动相: 正丁醇:HAc:H2O = 5:2:3 Rf值:腺苷-5`-磷酸0.35, 胞苷-5`-磷酸0.24, 脱氧腺苷-5`-磷酸三氯乙酯0.74, 脱氧胸苷酰(3`,5`)脱氧胸腺嘧啶核苷0.61, 5-甲基尿苷-5`-磷酸酯(胸苷-5`-磷酸)0.37, 5`-0-磷酸基脱氧胸腺嘧啶核苷酰-(3`5`)脱氧胸腺苷酰-(3,5)脱氧胸苷0.19, 5`-0-三氯乙基-磷酸脱氧腺苷酰(3`,5)脱氧腺苷0.68, 尿苷-5`-磷酸0.30 四、应用 本文档共96页；当前第68页；编辑于星期六\11点31分 §5－2 薄层色谱法（TLC） 一、基本原理和特点 二、吸附剂 三、操作技术 四、应用 本文档共96页；当前第31页；编辑于星期六\11点31分 一、基本原理和特点 [原理]: 经典的薄层色谱是以吸附剂为固定相的一种液相色谱法，利用试样组分在流动相（展开剂）和固定相（吸附剂）之间反复吸附、溶解而分离。 实际上，薄层色谱的固定相不仅仅局限于吸附剂，也可以在铺好的惰性薄层上均匀地再涂一种作为固定液的液体，进行分配分离。 本文档共96页；当前第32页；编辑于星期六\11点31分 一、基本原理和特点 [特点]: 装置简单、操作方便 展开时间短（10～60min） 灵敏度高：可以检出0.01μg 显色方法多于纸色谱 [缺点］：Rf值的重复性差 定性分析：Rf 定量分析： 光度法或荧光法 本文档共96页；当前第33页；编辑于星期六\11点31分 二、吸附剂 ［要求］： 合适的吸附力 与展开剂、被吸附物质均不起化学反应 粒度细小而且均匀 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶。此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。 根据范氏方程，减少涡流扩散项 本文档共96页；当前第34页；编辑于星期六\11点31分 1. 氧化铝 氧化铝可分为中性、碱性和酸性三种，一般常用碱性氧化铝。通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性和碱性物质。酸性化合物可用酸性氧化铝分离。 　　氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份时，吸附剂表面的吸附中心会被水分子占据） 本文档共96页；当前第35页；编辑于星期六\11点31分 1. 氧化铝 活性 Ⅰ　　 Ⅱ　　Ⅲ　　Ⅳ　　Ⅴ 含水量(％) ０　　３　　６　 １０　１５　 Δ 100 ~ 150oC, 除去Al2