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高效液相色谱法分析农药残留中活性成分的全代物 酰胺钠杂草是20世纪80年代和90年代国际开发的具有超高效、光谱、低毒、低残留、高选择性和环境适应性的杂种酶抑制剂。其代表品种包括kih2031、双草醚（kih-2023）、托吡咯烷酮（kih-6127）、托吡咯烷酮（pylibenzhov）和环脂草醚（pyliftalid）。1998年, 中国科学院上海有机化学研究所和浙江省化工研究院有限公司在研究嘧啶水杨酸类除草活性成分的分子结构与除草活性关系的过程中创制了2-嘧啶氧基-N-芳基苄胺类的高效油菜田除草剂丙酯草醚和异丙酯草醚, 现均已获得了国家农药临时登记证和生产批准证书。放射性同位素示踪研究表明, 丙酯草醚需通过代谢活化转变为嘧啶水杨酸类化合物才起除草作用, 属于ALS抑制剂类除草剂;丙酯草醚对环境安全, 其在土壤中的残留 (可提态残留和结合残留) 、矿化和归趋等均符合欧盟对除草剂登记的新要求;在推荐剂量下使用丙酯草醚, 采收后的油菜籽中丙酯草醚的残留量远低于可能对人体造成伤害的剂量。此外, 上海有机所还发现了一些高效、广谱、安全、选择性好, 具有潜在开发前景的除草剂候选化合物。上述研究均表明2-嘧啶氧基-N-芳基苄胺类除草剂先导化合物在除草剂创制中的有很大的拓展空间。 近年来, 上海有机化学研究所借助计算机辅助设计技术, 通过组合化学方法对该类化合物的分子结构与除草活性的深入研究, 发现了一些新的具有潜在开发前景的6位氯取代2-嘧啶氧基-N-芳基苄胺类除草剂候选化合物。为研究这些化合物在田间使用后可能引起农产品和食品中的农药残留问题, 本研究拟采用分析结果准确、可靠、重现性好的HPLC-MS\MS建立农药残留分析方法, 以期确定这些组分可能的残留量, 而同位素氘标记物是HPLC-MS\MS分析中所必需的同位素内标物。本文报道了5种具有潜在开发前景的除草剂候选化合物的甲氧基氘取代物的合成、鉴定和化学纯度分析。 1 试验材料和方法 1.1 仪器和检测仪器 Varian 300低温超导核磁共振仪 (不注明者均以CDCl3为溶剂, TMS为内标) 和Varian Prominence高效液相色谱仪 (配SIL-20A自动进样器、SPD-20A紫外检测器) 购自美国瓦里安公司;质谱分析使用Waters GCT Premier高分辨质谱仪 (美国沃特斯公司) 、Agilent5975C GC-MS气相色谱质谱联用仪 (美国安捷伦公司) 和Shimadzu LCMS-2010EV液相色谱质谱联用仪 (日本岛津公司) ;Nicolet AVATAR 330FT-IR红外光谱仪购自美国尼高力仪器公司;SGW X-4显微熔点仪购自上海精科实业有限公司;UV-1801紫外/可见分光光度计购自北京瑞利分析仪器公司。色谱柱Diamonsil C18柱 (5μm, 250mm×4.6 mm) 购自北京迪马科技公司。 (2H4) 甲醇 (2H, 99.6%) 和2-甲硫基-4, 6-二氯嘧啶购自比利时Acros公司;标准样品4-[2-氯-6- (4, 6-二甲氧基-2-嘧啶氧基) 苄氨基]苯甲酸异丙酯 (SIOC0171) 、4-[2-氯-6- (4, 6-二甲氧基-2-嘧啶氧基) 苄氨基]苯甲酸正丙酯 (SIOC0172) 、N-[2-氯-6- (4, 6-二甲氧基-2-嘧啶氧基) 苄氨基]-5-溴吡啶 (SIOC0265) 、N-[2-氯-6- (4, 6-二甲氧基-2-嘧啶氧基) 苄基]-4-溴苯胺 (SIOC0426;开发名称:棉田除草剂溴嘧氯草醚) 和N-[2-氯-6- (4, 6-二甲氧基-2-嘧啶氧基) 苄基]-2, 5-二氯苯胺 (SIOC0991) 均通过相应粗品多次重结晶纯化, 纯度均大于99.99%。色谱纯冰醋酸购自美国Tedia公司, UV测定用甲醇购自美国Fisher公司, HPLC采用甲醇均为色谱纯。水为新蒸的二次重蒸水。其他试剂均为市售分析纯试剂, 参照文献方法纯化。 1.24 6-22h3基丁基吡啶3的合成 以全氘代甲醇为起始原料, 按照文献方法进行合成, 合成路线见图1。 1.36 体系ph值的确定 在0~5℃条件下, 将饱和氢氧化钾 (22.44 g, 0.40 mol) 的水溶液 (23 m L) 缓慢滴入6-氟-2-氯苯甲醛 (4, 31.72 g, 0.20 mol) 的二甲亚砜溶液 (300 m L) 中。滴加完毕搅拌2 h, 升至室温, 搅拌2 h。反应结束后, 将反应混合物倾入剧烈搅拌的冰—水 (2.2 L) 中, 用盐酸 (2 M) 调体系p H值至3~4, 析出大量固体, 搅拌2 h, 抽滤, 干燥后得白色固体 (27.76 g, 89%) 。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ11.90