KJ04 样品前处理技术基础理论.pptVIP

样品前处理的各种方法 方法 选择性基础 沉淀 溶解度 液—液萃取 样品在两相中的分配 固相提取 样品在吸附剂上的吸附与分配 渗析/超滤 分子量与体积 电泳 电荷/淌度 蒸馏/蒸发 沸点与蒸气压 传统的样品前处理方式液液萃取 (LLE) 根据分析物在互不相溶的两相中的溶解度差异来将分析物从一相提取至另一相中。 装置简单 操作容易 常被认定为成本低廉 费时费力 常因乳化效益使相间分层不彻底，使得重复样的分析结果存在显著偏差(常在10%~20%之间) 若需萃取的样品体积大（如环境分析中），则可能消耗大量的有机溶剂。由此可能在购买、储藏、处置溶剂时花费庞大*。 注: 大量储存、使用和处置溶剂可对操作者的长期健康产生负面影响，并可带来火灾隐患 有机层 水层 传统的样品前处理方式蛋白质沉淀法 (PPT) 1- 吸取200 ?L血浆 2- 加入400-600 ?l乙腈 3- 高速混合 4- 离心取上清液 5- 以水稀释后进样 在血清、血浆或尿样中加入有机溶剂，使样品中的蛋白质沉淀，然后经离心去除 简单快速 可被自动化，适用于高通量分析 若检测限要求不高时较适用 属快速但粗糙的净化技术， 仅可去除约90-95%的蛋白质，而基质中的高盐份和其他内源性干扰物如磷脂等完全未被去除（此为LC/MS分析时遭遇离子抑制的根源!） 分析柱寿命较短，LC/MS系统常需停机进行离子源清洗 导致样品稀释, 不适合用于超痕量分析场合 进样前可能需要进行溶剂蒸发以获得足够的灵敏度(若无内标，分析重现性不佳) 固相萃取技术 (SPE)先进的样品前处理方法 可同时取得对样品的净化与富集效果，彻底去除干扰物并浓缩样品 分析结果呈高度可靠性 使得检测灵敏度和选择性大大提高 明显延长色谱柱寿命，减小系统维修的频度 样品制备快速、涉及人工少、溶剂用量少 分析结果的精密度提高(偏差常 5%) 多样化的产品设计迎合不同样品通量要求 依据目标化合物在固定相和流动相间分配系数的不同将其从液相提取至固定相中（ 本质上为色谱分离方法） 样品前处理的重要性及原则 一 样品前处理方法及比较 二 样品前处理一般性步骤 三 固相萃取技术 四 概 念 固相提取（Solid Phase Extraction，SPE)是一种重要的样品前处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展起来的。利用固相吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。 原理及特点 利用杂质或目标化合物与样品基体溶剂和吸附剂之间亲和力的相对大小差异实现净化分离。与传统的液液萃取相比具有明显的优势。 特点 回收率、富集倍数高 有 毒 溶 剂 用 量 少 两 相 分 离 操作简单、易自动化 更有效的是分析物与杂质分离 应用领域 已被广泛的应用于： 化学、化工行业 制药行业 临床医学研究 食品安全领域 烟草行业 环境保护 中草药研究 …… 固相提取技术 Solid Phase Extraction (SPE) 色谱填料颗粒填装小柱 1978年由Waters首次推出商品化产品： “Sep-Pak Cartridges” Sample Enrichment Purification 非常成熟的技术 数千化合物的参考文献 洗脱剂 废液 0.01 to 1000 克 多种规格 梨的色谱分析：SPE的作用不同提取过程的结果比较 乙腈提取 未净化 乙腈提取 用水稀释 Oasis? HLB 提取 乙腈提取 用水稀释 Oasis? HLB 提取 用Sep-Pak? 氨基小柱净化 ? 1999 Waters Corp. 固相提取技术Solid Phase Extraction (SPE) 两相 ——液相与固相 容易分离 多种吸附剂可供选择 反相－最常用！ 正相 离子交换 具有高选择性的新型吸附剂 溶剂消耗少 —与液液提取相比 减少人力与时间 — 容易自动化 液相色谱基础 HPLC 与SPE之区别 HPLC SPE 颗粒直径 ~5 μm 40-80 μm 柱床效率 high low 柱外体积 low high 柱长 5-30 cm ~1 cm 塔板数 (N) ~10,000 50 Bottom line: HPLC can separate similar compounds. SPE requires a significant selectivity difference between compounds for separation. Compounds not well re