《干细胞体内近红外二区示踪成像操作规程》征求意见稿.docx

T/XXXX XXXX—2023 1 干细胞体内近红外二区示踪成像操作规程 1 范围 本文件确立了干细胞体内近红外二区示踪成像的操作程序， 规定了操作中使用的试剂材料与仪器设 备，干细胞体内近红外二区示踪成像操作程序的构成，以及各步骤的操作指示和各步骤之间的转换条件， 描述了干细胞体内近红外二区示踪成像的追溯方法。 本文件适用于干细胞小鼠体内近红外二区示踪成像试验。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件， 其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本 文件。 GB 19489—2008 实验室 生物安全通用要求 HJ 421 医疗废物专用包装袋、容器和警示标志标准 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 符号和缩略语 下列符号和缩略语适用于本文件。 CAS：美国化学文摘服务社（Chemical Abstracts Service） CCK-8：细胞试剂（Cell Counting Kit-8） DAPI：4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole) FLI：荧光成像（fluorescence imaging） FBS：胎牛血清（fetal calf serum） PBS：磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffered saline） PbS：硫化铅（lead sulfide） Rnase—A：核糖核酸酶 A(Ribonuclease A) Sulfo—SMCC ： 4- (N- 马 来 酰 亚 胺 甲 基 ) 环 己 烷 -1- 羧 酸 磺 酸 基 琥 珀 酰 亚 胺 酯 钠 盐 （4- (N-Maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylic acid 3-sulfo-N-hydroxysuccinimide ester sodium salt） α-MEM：α最低必须培养基（alpha minimal essential medium） 5 试剂材料与仪器设备 T/XXXX XXXX—2023 2 5.1 试剂材料 5.1.1 除非另有说明，本试验所有试剂应符合制造商认证的细胞培养等级。其他试剂应选尽可能高的 纯度。 5.1.2 本试验所用的水应为电阻率大于 5 MΩ?cm 的纯水。其他试剂材料应符合表 1 的要求。 表1 试剂材料清单 序号 试剂材料名称 用途 浓度配比 要求 调配方法 1 Ⅱ型胶原酶 细胞培养 0.03 g/ml CAS No:9001-12-1 2 α—MEM 培养基 细胞培养 / 1000 mg/L D-葡萄糖， 292 mg/L L-谷氨酰胺， 110 mg/L 丙酮酸钠， 2200 mg/L 碳酸氢钠， pH 值 7.0～7.4 3 胎牛血清 细胞培养 0.02 g/ml 4 青霉素（PNC ） 细胞培养 100 U/ml 5 链霉素（SM） 细胞培养 100 U/ml 6 胰蛋白酶 细胞培养 2 mg/ml 7 地塞米松 细胞培养 0.1 μmol/L 8 维生素 C 磷酸 盐 细胞培养 50 μmol/L 9 β--磷酸甘油 细胞培养 10 mmol/L 10 3--异丁基--1-- 甲基黄嘌呤 细胞培养 0.5 mmol/L 11 胰岛素 细胞培养 10 μmol/L 12 钙黄绿素 细胞活性检测 2 μmmol/L 13 碘化丙啶 细胞周期测试 8 μmmol/L 14 油红 O 染液 染色 5 mg/ml 15 硫代硫酸钠 量子点合成 10 mmol/L 16 醋酸铅 Pb（ACO2） 量子点合成 10 mmol/L 17 硫化钠（Na2S） 量子点合成 10 mmol/L 18 氢氧化钠（NaOH） 量子点合成 1/6 mol/L 19 Rnase--A 酶 细胞标记 50 mg/ml 20 穿膜肽 Tat 化学交联 10 mg/ml 21 Sulfo--SMCC 染色 1 mg 22 DAPI 染液 稳定性试验 5 mg/ml 23 酒精 消毒 75%医用酒精 24 CCK--8 试剂盒 细胞增值能力测试 / 25 碱性磷酸酶检测 试剂盒 细胞成骨诱导分化测试 / 26 小鼠 细胞提取与动物模型建立 / 近交系， 6 周龄以上 5.2 仪器设备 T/XXXX XXXX—2023 3 仪器设备的用途及要求应符合表2的规定。 表2 仪器设备清单 序号 仪器设备名称 用途 要求 1 制冰机 细胞试验 雪花样冰 2 自动酶标仪 细胞试验 200 nm～1000 nm全波长 3 常温离心机 量子点合成 3000 rpm/min 4 电子天平 量子点合成