高效液相色谱法5.ppt

20.1 概述 一、高效液相色谱的特点 二、高效液相色谱的分类 本文档共37页；当前第1页；编辑于星期二\23点8分 分析对象 气相色谱：气体和沸点较低的化合物，占有机物总数20% 高效液相色谱：高沸点、热稳定性差、分子量大的物质，占有机物总数80% 流动相 气相色谱：对组分没有亲和力的惰性气体，对分离选择性几乎无影响 高效液相色谱：可选用不同极性的液体；选择余地大；对分离影响大（与组分或固定相均作用） 色谱柱温 气相色谱：一般较高 高效液相色谱：通常为室温 高效液相色谱 vs 气相色谱 本文档共37页；当前第2页；编辑于星期二\23点8分 一、高效液相色谱的特点 高压： 150 - 350 ?105 Pa 高速： 一般 1 h, 1min. 高效： 柱效高 高灵敏度： 10-9 g（紫外检测器） 10-12 g（荧光检测器） 成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂； 缺少灵敏度高的通用型检测器； 复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱； 受压易分解或变性的生物样品。 优点： 局限： 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析 本文档共37页；当前第3页；编辑于星期二\23点8分 二、高效液相色谱的分类 分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 尺寸排阻色谱 疏水作用色谱 按分离原理 制备色谱 柱内径10mm 半制备色谱 柱内径5-10mm 分析型色谱 柱内径 5 mm 按分离规模 本文档共37页；当前第4页；编辑于星期二\23点8分 20.2 高效液相色谱仪 本文档共37页；当前第5页；编辑于星期二\23点8分 1.流程 一、流程及主要部件 本文档共37页；当前第6页；编辑于星期二\23点8分 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 附属系统 2.主要部件 本文档共37页；当前第7页；编辑于星期二\23点8分 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa； 为获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一； 具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。 柱塞式往复泵 本文档共37页；当前第8页；编辑于星期二\23点8分 (2) 梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 本文档共37页；当前第9页；编辑于星期二\23点8分 (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： 本文档共37页；当前第10页；编辑于星期二\23点8分 (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 本文档共37页；当前第11页；编辑于星期二\23点8分 匀浆法装柱示意图 本文档共37页；当前第12页；编辑于星期二\23点8分 高效液相色谱填料 填料的热力学特性影响色谱柱的选择性 填料的动力学性质或结构特点影响色谱柱的效率（颗粒的大小、形状、均匀性、比表面积；孔径、孔体积等）。 基质 无机基质材料 硅胶(silica)、氧化铝、氧化锆、氧化钛、羟基磷灰石、多孔玻璃、多孔石墨碳等 有机基质材料： 天然多糖凝胶（如葡聚糖系、琼脂糖系等） 高聚物树脂（如交联苯乙烯树脂、交联聚甲基丙烯酸酯类树脂等） 特点 本文档共37页；当前第13页；编辑于星期二\23点8分 颗粒状 整体柱 微孔---孔径 2 nm；中孔---孔径50 nm, 2 nm；大孔---孔径50 nm 使用中孔和大孔填料；微孔易造成色谱峰拖尾 物理形态 本文档共37页；当前第14页；编辑于星期二\23点8分 (5) 液相色谱检测器 溶质性质检测器：对被分离组分的物理或化学特性有响应 紫外、荧光、电化学检测器等 总体检测器：对试样和流动相总的物理或化学性质有响应 示差折光检测器、电导检测器等 分类 紫外光度检测器(ultraviolet photometric detector) 光电二极管阵列检测器(photo-diode array detector) 荧光检测器(fluorescence detector) 示差折光检测器(differential refractive index detector) 蒸发光散射检测器（evaporati