高效液相色谱法-完整版PPT课件.pptxVIP

第十二章 高效液相色谱法; 第一节 高效液相色谱法概述 ;一、高效液相色谱法（HPLC）与经典液相色谱法（LC）的区别;二、HPLC与GC的差别;2. 流动相的差别; 第二节 高效液相色谱仪;一、高压输液系统;● 等强度洗脱 在同一分析周期内流动相的组成保持恒定，适合于组分数目少，性质差别小的试样。 ● 梯度洗脱 在一个分析周期内，程序控制改变流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度、pH值等。分析组分数目多、性质差别大的复杂试样。 ; 进样系统包括进样口、注射器和进样阀等。作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。进样器有手动进样器和自动进样器，一般常用带有定量管的六通进样阀。; 分离系统包括色谱柱和恒温箱，是色谱仪的关键部件。柱温一般为室温或接近室温。;四、检测系统;第三节 高效液相色谱法的主要类型 ; ; 流动相：底剂（烷烃）+ 有机极性调节剂 例： 正己烷或庚烷 + 氯仿- - - 调节流动相溶剂的极性，以控制组分合适的保留时间，强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱。 ;二、液-液分配色谱法（LLC）;三、化学键合相色谱法（BPC）;;3. 流动相;固定相的选择 选分布均匀、粒径小的球形固定相(≤10μm），首选化学键合相。;4．洗脱方式的选择; ●样品有紫外吸收时使用紫外检测器； ●样品或其衍生物能产生荧光时使用荧光检测器 (适合于药物和生物化学样品的分析)。 ●样品有氧化还原性质时使用电化学检测器； ●折光率检测器(是一种通用型检测器)。; 一、定性分析 HPLC的定性分析方法与GC法完全相似，定性分析就是确定色谱图中的每一个峰代表的是什么样的物质。主要是利用保留时间或相对保留时间进行定性判断。 方法1：保留值定性 相同的物质在相同的色谱条件下具有相同的保留值。因此常将组分的保留值。 方法2：与标准物质的保留值进行比较来定性。 方法3： 峰高叠加法来定性。 ;二、定量分析;外标法是以对照品的量对比求算试样含量的方法。只要待测组分出峰、无干扰、保留时间适宜即可用外标法进行定量分析。 内标法是以待测???分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法。使用内标法可以抵消仪器稳定性差、进样量不够准确等原因带来的定量分析误差。内标法可以分为校正曲线法、内标一点法（内标对比法）、内标二点法及校正因子法。 内加法是将待测物i的纯品加至待测样品中，测定增加纯品后的溶液比原样品溶液中i组分的峰面积增量，来求算i组分含量的的定量分析方法。 ;谢谢观看