动物细胞培养和核移植技术-ppt课件.pptxVIP

•动物细胞培养 是其他动物细胞工程技术的基础。 •动物细胞核移植 •动物细胞融合 •生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 2.2 动物细胞工程 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个 细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长 和增殖。 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 阅读P44-P45页回答问题 问题1：试说动物细胞培养大致过程、原理 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? (一)概念 (二) 动物细胞培养过程 • 胚胎或幼龄动物的器官、组织 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞增殖缓慢，核 型可能变化 10代以内，保持正常二倍体核型 胰蛋白酶处理 分瓶培养 10-50代细胞 单个细胞 培养液 原理： 有丝分裂 动物细胞培养 不能最终培养 成生物体 贴壁生长 接触抑制 传代培养 原代培养 细胞悬液 问题2：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细 胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散成单个细胞、细胞群(团)后容易培养，细胞所需 的营养容易供应，其代谢废物容易排出 问题4：为什么用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理？ 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质， 胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题5：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适 宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。 问题6：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 ②传代培养 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋 白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入 新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内 转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养. ( 分瓶培养的过程) 强调一：原代培养与传代培养 ①原代培养 定义： 人们通常将动物组织消化后的初次培养 称为原代培养。 原代培养 传代培养 ▲细 ) 传代50代以后，部分细胞遗传物质 发生了改变，能无限增殖，获得不死性，叫细 胞系。 系系：： 般 胞胞 (一 ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代， 遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 •原代培养和传代培养、细胞株和细胞系(了解) 细胞 悬浮 液 无限传 代 10代 细胞 50代 细胞 强调二：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁： 在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴 附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求： 帖附。 表面光滑、无毒、易于 强调三：接触抑制 ■ 当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 充足营养(糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元 素等合成成分及血清、血浆等天然成分。) 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 适宜温度、 PH和气体环境；无菌无毒环境 P46讨 论 1、无菌、无毒环境 (无菌处理和添加抗生素目 的？更换培养液的好处？) 2、营养:与体内相同，液体合成培养基：糖、氨 基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等， 通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适 3、温度和PH 温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度： PH：7.2-7.4 4、气体环境95%空气、 5%CO2--维持培养液PH (三) 动物细胞培养的条件P46 动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培 养基有何独特之处？ 主要成分：(葡萄糖、氨基酸)、(水、无机盐)、维 生素和动物血清等。独特之处有： 1、液体培养基 2、 成分中有动物血清等 (四) 动物细胞培养技术的应用 . P47最上面 . 1、大规模的生产生物制品。 . 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体 细胞。 . 3、检测判断物质的毒性。 . 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生 理、病理、药理等方面的研究，如用于 筛选抗癌药物 等，为治疗和预防癌症及其 他疾病提供理论依据。 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 培养结果 植物体 细胞株、细胞系 培养目的 快速繁殖、培育 无病毒植株 获得细胞或细胞 分泌蛋白 植物组织培