Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备的开题报告.docxVIP

Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备的开题报告 一、研究背景 Nanog是一种关键的转录因子，最早发现于小鼠胚胎干细胞中，并在多种类型的细胞中表达。Nanog对于维持胚胎干细胞的自我复制和未分化状态至关重要，并且在晚期胚胎发育中也有重要的作用。其功能缺陷会导致胚胎发育停滞，而高表达则可能促进肿瘤的发生。因此，了解Nanog的生物学功能，对于解析胚胎发育、干细胞生物学以及诊断和治疗肿瘤具有重要意义。 二、研究目的 本研究主要目的是通过原核表达、蛋白纯化及抗体制备等技术，获得高效纯化的Nanog蛋白和高特异性的Nanog抗体，为了解Nanog的生物学功能、发掘新的作用靶点以及构建Nanog的作用网络提供有力的实验工具。 三、研究内容及方法 1. Nanog基因的原核表达 将人类Nanog基因克隆入原核表达载体pET-28a，构建重组质粒；通过化学转化等方法将重组质粒导入大肠杆菌（E.coli）细胞内，利用IPTG诱导表达。 2. Nang蛋白的纯化 以Ni2+-NTA亲和层析纯化为主，包括裂解菌细胞、提取目标蛋白、层析纯化、洗脱靶蛋白、再生反应等步骤。 3. Nanog抗体的制备 将Nanog蛋白注射入小鼠体内，诱导其产生相应的抗体；待抗体滴度达到一定水平后，收集小鼠血清，进行免疫球蛋白纯化、测定抗体滴度等步骤，最终获得高纯度的Nanog抗体。 四、预期结果 通过本研究的实验操作，预计能够获得高效纯化的Nanog蛋白和高特异性的Nanog抗体。这将为深入研究Nanog的生物学功能、构建Nanog的作用网络提供有力的实验手段，并有望为临床医学提供新的诊断和治疗思路。