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2023-11-07 发布于广东
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分子杂交演示文稿.ppt

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分子杂交演示文稿本文档共29页；当前第1页；编辑于星期二\10点30分（优选）第六讲分子杂交本文档共29页；当前第2页；编辑于星期二\10点30分分子杂交实质上是DNA或RNA单链之间退火形成DNA/RNA或DNA/DNA杂合分子。应用范围：重组子鉴别基因分离 DNA片段分析基因表达研究。。。。。。本文档共29页；当前第3页；编辑于星期二\10点30分当用一个标记核酸分子与核酸样品杂交，便可以查明该样品中是否存在与该标记核酸分子具有同源性的分子。本文档共29页；当前第4页；编辑于星期二\10点30分 2 探针的概念及其标记技术 2.1 探针(probe): 用于检测特定基因或转录产物存在或表达的DNA、RNA或寡核苷酸。本文档共29页；当前第5页；编辑于星期二\10点30分 2.2 探针的标记技术 2.2.1 均匀标记 2.2.2 末端标记本文档共29页；当前第6页；编辑于星期二\10点30分 2.2.1 均匀标记 ⑴ 切口平移法标记 DNaseI HO P 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ DNaseI与 Pol I 的切口移位 Pol I 本文档共29页；当前第7页；编辑于星期二\10点30分 ⑵ 随机引物标记 ⑶ PCR扩增标记要求： [a-32P]dNTP 本文档共29页；当前第8页；编辑于星期二\10点30分 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 热变性随机引物退火 ?-32PdNTP Klenow 酶 ~~ 5’ 5’~~ 5’~~------- ---------~~ 5’ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ ~~ 本文档共29页；当前第9页；编辑于星期二\10点30分 2.2.2 末端标记 ⑴ DNA片段的末端标记 Klenow酶 3’-末端补平(3’-末端标记) 5’-ACGTTGCAAACTG-3’ 3’-TGCAACGTTTGAC-5’ 本文档共29页；当前第10页；编辑于星期二\10点30分四种不同的补平反应 5’-GGATCC-3’ BamHI 5’-G GATCC-3’ 3’-CCTAGG-5’ 3’-CCTAG G-5’ dNTP dGTP dGTP/dATP dGTP/dATP/dTTP 5’-GGATC 5’-GG 5’-GGA 5’-GGAT 3’-CCTAG 3’-CCTAG 3’-CCTAG 3’-CCTAG GATCC-3’ GATCC-3’ GATCC-3’ GATCC-3’ CTAGG-5’ GG-5’ AGG-5’ TAGG-5’ I S1 S1 S1 5’-GG CC-3’ 5’-GGA TCC-3’ 5’-GGAT ATCC-3’ 3’-CC GG-5’ 3’-CCT AGG-5’ 3’-CCTA TAGG-5’ II III Ⅳ 本文档共29页；当前第11页；编辑于星期二\